北柴胡谱效关系研究及超临界提取物GC-MS分析

论文摘要

目的：一方面建立柴胡总皂苷含量测定方法，运用所建立的方法对不同产地及不同采收期的北柴胡药材进行含量测定；研究柴胡总皂苷对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型的影响，掌握其药效特点，为北柴胡谱效关系探讨奠定基础；对北柴胡皂苷类成分的高效液相（HPLC-ELSD）色谱指纹图谱与保肝作用进行相关性分析，阐明北柴胡保肝作用的药效物质基础；一方面以河南嵩县地区北柴胡为对象，研究北柴胡超临界提取物的化学成分及动态积累规律。方法：含量测定以柴胡皂苷a为对照品，磷酸-对二甲氨基苯甲醛显色；药效学研究采用腹腔注射四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤，以柴胡总皂苷高、中、低剂量同时预防给药7天，检测空白组、对照组、总皂苷不同剂量组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性，同时测定肝组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性；谱效关系研究采用HPLC-ELSD方法构建北柴胡正丁醇部位的色谱指纹图谱特征，以药效学的研究方法获取北柴胡正丁醇部位对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤血清中ALT和AST水平值以及肝组织中MDA含量和SOD活力值。利用化学计量学与典型相关分析为处理手段对色谱-药效数据进行相关分析；运用气相-质谱联用（GC-MS）分析北柴胡超临界提取物中化学成分的组成。结果：以柴胡皂苷a为对照品的柴胡总皂苷含量测定在0.0306～0.3062mg内线性关系良好（r=0.9996）,方法学考察结果的RSD均小于3.30%；与模型组比较，柴胡总皂苷（给药剂量20g·kg-1，相当于临床用量的15.5倍）可有效抑制造模小鼠血清中ALT、AST的升高（P<0.05），同时可提高造模小鼠肝组织中SOD的活力，降低肝组织中MDA的含量（P<0.05）；HPLC-ELSD指纹图谱中共提取出12个共有峰，系统聚类分析将12个共有峰归为两大类（“主皂苷”簇和“微量皂苷”簇）。不同产地柴胡药材之间的保肝作用存在统计学差异（P<0.05）。聚类分析和典型相关分析确定了肝损伤血清中ALT水平值和肝组织中SOD活力值与皂苷类化合物SSa和SSd之间的相关性，两变量组中提取出的典型变量对U1,V1之间的相关系数为0.842，显著水平α=0.039；从北柴胡超临界提取物中共鉴定了36个相对含量较高的成分，占提取物总量的74.32%-90.45%。提取物中脂肪酸类化合物相对含量在45.10%-80.95%之间；醛类在1.61%-5.65%之间；酮类在0.65%-1.28%之间；酯类在4.80%-8.12%之间。结论：柴胡总皂苷含量测定方法简便易行，重现性好，可用于柴胡总皂苷含量的测定。不同产地北柴胡药材的总皂苷含量存在明显差异，不同采收期北柴胡药材的总皂苷含量也存在明显的差异，其中采收期为9月28日的北柴胡样本的总皂苷含量最高；从北柴胡中提取的柴胡总皂苷对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有保护作用；北柴胡保肝作用（血清中ALT水平值和肝组织中SOD活力值）的药效物质基础为SSa和SSd。中药谱效关系研究是探讨北柴胡化学成分与药效相关性的有效途径。本文提出的数据分析思路融合了化学计量学和典型相关分析，弥补了已有中药谱效关系研究手段的不足，为完善中药谱效关系研究提供了有意义的尝试和新的思路；北柴胡中脂肪酸类、醛类、酮类及酯类成分的相对比重均随着采收期的不同而呈现明显差异。此分析为北柴胡药材的种植及采收提供了一定的科学依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 北柴胡谱效学研究
• 实验1 不同采收期和不同产地北柴胡中总皂苷含量测定
• 1 实验仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 实验方法
• 2.1 供试液的制备
• 2.2 对照品储备液的制备
• 2.3 最佳测定波长的选择
• 2.4 标准曲线的建立
• 2.5 精密度试验
• 2.6 稳定性试验
• 2.7 方法重复性试验
• 2.8 加样回收率试验
• 2.9 样品测定
• 实验2 柴胡总皂苷对小鼠急性肝损伤的保护作用
• 1 材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂及药物
• 1.3 仪器
• 2 试验方法
• 2.1 柴胡总皂苷提取液的制备
• 2.2 动物分组
• 2.3 剂量设计及造模
• 3 结果
• 实验3 北柴胡谱效学探讨
• 1 材料
• 1.1 仪器与试剂
• 2 试验方法
• 2.1 柴胡总皂苷提取液的制备
• 2.2 指纹图谱供试品溶液的制备
• 2.3 动物分组及给药
• 3 色谱指纹图谱的获取及色谱数据的评价分析
• 3.1 样品色谱的测定及指纹图谱共有模式的建立
• 3.2 指纹图谱相似度计算
• 3.3 样品色谱共有峰
• 3.4 指纹图谱的化学计量学分析
• 4 药效学考察结果与分析
• 4.1 保肝作用结果
• 4.2 不同产地柴胡样本之间药效学指标的方差齐性检验
• 4.3 组间比较及样本聚类分析
• 5 谱效关系探讨
• 5.1 综合
• 5.2 典型相关分析数据的建立
• 5.3 正态性检验
• 5.4 典型相关分析
• 第二部分 北柴胡 GC-MS 分析不同采收期的北柴胡超临界提取物的 GC-MS 分析
• 1 试验材料
• 1.1 药材及试剂
• 1.2 仪器
• 2 提取方法
• 3 GC-MS 分析
• 3.1 供试液的制备
• 3.2 色谱条件及样品测定
• 3.3 样品测定
• 讨论
• 第一部分
• 实验 1 不同采收期和不同产地北柴胡总皂苷含量测定
• 实验 2 柴胡总皂苷对小鼠急性肝损伤的保护作用
• 实验 3 北柴胡谱效学探讨
• 第二部分 北柴胡 GC-MS 分析
• 结论
• 参考文献
• 附录 1 附图
• 附录 2 文献综述
• 参考文献
• 附录 3 在校期间论文论著和科研情况