西瓜、甜瓜杂种一代种子纯度鉴定的研究

论文摘要

本研究利用了形态标记、同工酶标记、种子贮藏蛋白标记和RAPD标记方法对四组西、甜瓜品种进行了种子纯度鉴定的研究,结果如下:1)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对四组西、甜瓜品种进行了过氧化物酶和多酚氧化酶同工酶标记。四组西、甜瓜品种在两种同工酶标记中均能稳定的出现同工酶谱带,但是多态性不够丰富,只有西瓜品种T×14E能够与其父本区分开,所以同工酶标记在西、甜瓜的种子纯度鉴定中的应用有很大的局限性。2)利用电泳技术对四组西、甜瓜品种种子醇溶和盐溶蛋白进行分析的结果表明,四组西、甜瓜品种不但能出现稳定的蛋白谱带而且多态性较丰富。醇溶蛋白A可将甜瓜品种中的黄河蜜6号与其父母本区分开;西瓜品种中的T×14E与其父本区分开。醇溶蛋白B可将甜瓜品种中的黄河蜜6号与其父本区分开;白兰蜜与其父母本区分开。盐溶蛋白A可将甜瓜品种中的黄河蜜6号与其父母本区分开。盐溶蛋白B可将两组甜瓜品种黄河蜜6号、白兰蜜与各自的父母本区分开。在研究过程中,由于凝胶配方的不同出现过凝胶容易破碎不易剥离的现象,所以应对凝胶配方做进一步的改进,以达到容易操作的目的。3)本实验以完全展平的子叶为材料,采用CTAB法提取细胞总DNA。实验证明用CTAB法所得DNA产率和纯度都较高,片段较大,适宜做RAPD分析。通过试验确定了适合西、甜瓜的最佳PCR反应成分（包括dNTP、引物、Mg2+、TaqDNA聚合酶等的浓度组合）,并通过对变性、退火、延伸时间,退火温度和循环次数的优化试验确定了省时的扩增程序,最终得到了一个重复性好、清晰度高、较理想的RAPD-PCR扩增体系。利用100条引物对四组西、甜瓜品种进行RAPD标记,共筛选出4条适合做上述品种种子纯度鉴定的引物,分别为S92、S162、S175和S181。所选出的4条引物能产生使甜籽一号、白兰蜜和黄河蜜6号与各自母本有效的区分开的特征条带;但未发现能使T×14E与其父母本区分开来的引物。

论文目录

• 摘要
• SUMMARY
• 缩略词
• 引言
• 第一章 文献综述
• 第二章 形态学标记
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果分析
• 2.1 对照实验
• 2.2 植株观察
• 2.3 叶片观察
• 2.4 幼果观察
• 3 讨论
• 第三章 同工酶标记分析
• 1 材料与试剂
• 1.1 材料
• 1.2 主要仪器
• 1.3 主要试剂
• 2 试验方法
• 2.1 过氧化物酶同工酶（POD）
• 2.2 多酚氧化酶（PPO）
• 3 结果分析
• 3.1 过氧化物酶同工酶（POD）
• 3.2 多酚氧化酶（PPO）
• 4 讨论
• 4.1 过氧化物酶同工酶粗酶液的制备
• 4.2 西瓜、甜瓜品种过氧化物酶同工酶酶谱特征分析
• 4.3 影响多酚氧化酶稳定性的因素
• 4.4 分离胶浓度对电泳效果的影响
• 4.5 同工酶技术在种子纯度研究上必须注意的问题
• 4.6 同工酶酶技术应用于种子纯度鉴定的可行性和局限性
• 第四章 种子贮藏蛋白的标记分析
• 1 材料与试剂
• 1.1 材料
• 1.2 主要仪器
• 1.3 主要试剂
• 2 试验方法
• 2.1 醇溶蛋白A
• 2.2 醇溶蛋白B
• 2.3 盐溶蛋白A
• 2.4 盐溶蛋白B
• 3 结果分析
• 3.1 醇溶蛋白
• 3.2 盐溶蛋白
• 4 讨论
• 4.1 种子蛋白电泳检测种子纯度可靠性问题
• 4.2 不同种类种子蛋白电泳技术之间的比较
• 4.3 不同凝胶配方之间的比较
• 4.4 种子蛋白电泳检测的重复性问题
• 4.5 种子蛋白电泳检测种子纯度的可行性
• 第五章 RAPD 分子标记分析
• 1 材料与试剂
• 1.1 材料
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试验试剂
• 2 试验方法
• 2.1 试剂配置
• 2.2 基因组DNA 提取（CTAB 法）
• 2.3 RAPD 反应体系的优化
• 2.4 dNTP（10mM）的筛选
• 2）的筛选'>2.5 10×PCR buffer（含20 mM MgCl₂）的筛选
• 2.6 Taq 酶（2U/μl）的筛选
• 2.7 引物（10μM）的筛选
• 2.8 模板的筛选
• 2.9 RAPD 随机引物的筛选
• 2.10 RAPD 扩增程序的筛选
• 2.11 琼脂糖凝胶电泳
• 2.12 电泳谱带的记录
• 3 结果分析
• 3.1 基因组DNA 的制备
• 3.2 RAPD 反应体系条件的优化和建立
• 3.3 引物的筛选
• 4 讨论
• 4.1 关于甜瓜基因组DNA 的制备
• 4.2 关于模板DNA 质量与含量
• 2+浓度、dNTP 浓度和引物浓度'>4.3 关于Mg²⁺浓度、dNTP 浓度和引物浓度
• 4.4 关于TaqDNA 聚合酶
• 4.5 关于变性、退火、延伸的温度和时间，以及循环周期的影响
• 4.6 影响扩增结果的外部因素
• 4.7 引物筛选与杂交种子纯度的鉴定
• 4.8 RAPD 分子标记技术的优点、缺点
• 4.9 RAPD 技术的在西、甜瓜种子纯度鉴定中应注意的问题
• 4.10 RAPD 技术应用于生产的可行性
• 第六章 结论
• 1 形态学标记
• 2 同工酶标记
• 3 贮藏蛋白标记
• 4 RAPD 分子标记
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 导师简介