中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒神经生长因子对PC12细胞阿片受体表达的影响

论文摘要

目的:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系（PC12）被广泛用于NGF的活性测定,同时用NGF处理PC12细胞后,PC12细胞分化成的交感神经元样细胞,在形态、生理、生化及功能方面接近于神经元,能形成神经突起和突触样连接,并且比较容易在体外稳定培养,是在分子水平上研究神经元分化较为理想的模型。但NGF促PC12细胞分化的具体机制还不清楚。有研究表明小鼠神经生长因子诱导PC12细胞分化时,内源性阿片受体有变化。提示我们NGF促PC12细胞分化的机制可能与阿片受体有关。因此,本文主要研究中华眼镜蛇毒神经生长因子（nNGF）对PC12细胞形态的影响及nNGF对PC12细胞阿片受体基因和蛋白质表达的影响,为进一步研究nNGF促PC12细胞分化机制提供一定的实验依据,同时也为nNGF的更广泛的研究奠定实验基础。方法:（1）显微镜观察50 ng/ml nNGF对体外培养的PC12细胞形态的影响。（2）用RT-PCR方法半定量地考察25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml nNGF对PC12细胞δ、κ阿片受体mRNA表达的影响的剂量效应;检测50 ng/ml nNGF处理后,设置5个不同时相点,观察PC12细胞δ、κ阿片受体mRNA表达与50 ng/ml nNGF的时间依赖关系;检测吗啡、纳络酮对nNGF作用的影响。（3）用Western blot方法检测25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml nNGF对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响的剂量效应;检测50 ng/ml nNGF处理后,设置5个不同时相点,观察PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达与50 ng/ml nNGF的时间依赖关系;检测吗啡、纳络酮对nNGF作用的影响。主要结果与结论:（1）PC12细胞对nNGF很敏感,nNGF能促进PC12细胞高度分化,长出神经样纤维,形态类似于神经元。（2） nNGF处理后PC12细胞δ、κ阿片受体mRNA的表达都具有一定的剂量效应。随着nNGF使用剂量的增加,PC12细胞κ阿片受体mRNA水平的表达会降低,其中50 ng/ml剂量组对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达水平的影响最显著,此剂量时κ阿片受体mRNA的表达水平最低;而PC12细胞δ阿片受体mRNA水平的表达则随剂量的增加而升高。（3） 50 ng/ml nNGF处理PC12细胞后,在1 d到10 d中,PC12细胞κ阿片受体和δ阿片受体mRNA水平的表达总体上相反,κ阿片受体mRNA水平的表达呈下调趋势;而δ阿片受体mRNA水平的表达呈上调趋势。（4） nNGF增强δ阿片受体mRNA的表达,该效应能被纳络酮逆转,而纳络酮的这个抑制作用又可以被吗啡逆转;nNGF降低κ阿片受体mRNA水平的表达,且能被吗啡、纳络酮分别逆转。（5） nNGF处理后PC12细胞κ阿片受体蛋白质和mRNA的表达趋势总体上一致。随着nNGF使用剂量的增加,PC12细胞κ阿片受体蛋白质水平的表达会降低,50 ng/ml剂量组对PC12细胞κ阿片受体蛋白质水平的影响最显著,蛋白质水平的表达最低。（6） 50 ng/ml nNGF处理PC12细胞后,在1 d到10 d中,PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达随时间的增加呈现降低的趋势,一直下调。（7） nNGF降低κ阿片受体蛋白质水平的表达,且能被吗啡、纳络酮分别逆转。（8） nNGF对阿片受体的表达有影响,阿片系统可能参与了nNGF促PC12细胞分化的过程。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写一览表
• 1 前言
• 2 中华眼镜蛇毒神经生长因子（nNGF）对PC12 细胞形态的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 3 中华眼镜蛇毒神经生长因子对 PC12 细胞阿片受体（δ,κ） mRNA 表达的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 中华眼镜蛇毒神经生长因子（nNGF）对PC12 细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 5 全文总结
• 6 文献综述 眼镜蛇毒神经生长因子的研究进展
• 参考文献
• 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录、科研情况
• 致谢