导读:本文包含了病毒增殖能力论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:角蛋白18,乳腺肿瘤,细胞增殖,细胞凋亡
病毒增殖能力论文文献综述
张青,黄钱,张春燕,刘晓燕,曾凡才[1]（2019）在《慢病毒介导CK18基因沉默对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响》一文中研究指出目的检测靶向沉默细胞角蛋白18(CK18)基因对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡、侵袭运动的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法建立CK18稳定沉默的BT549细胞株,分为3组,以CK18(CK18-sh21、CK18-sh22、CK18-sh23及CK18-sh24)靶向沉默的细胞为实验组CK18-shRNA,加入空载体的为阴性对照(sh-Con)组,未处理为空白对照(Wt)组。采用蛋白印迹法(Western blot)对细胞系进行CK18表达鉴定。采用CCK-8法、平板克隆形成法检测CK18表达缺失对细胞增殖能力的影响;通过流式细胞技术(PE–Annexin V双染法)检测CK18基因沉默后对BT549细胞凋亡的影响;通过PI-FACS法检测沉默CK18对BT549细胞周期的影响;采用划痕试验、Transwell法检测CK18沉默对细胞运动及侵袭能力的影响;采用Western blot检测与侵袭转移相关的分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达情况。结果建立了CK18沉默的BT549细胞系,CK18的表达被显着抑制,CK18-sh23组相对sh-Con组抑制率最高,可达73%。与Wt组、sh-Con组相比,CK18-shRNA细胞增殖能力在24 h、48 h和72 h降低,克隆形成能力下降,细胞运动、侵袭能力下降,细胞凋亡率和G2期细胞比例均增加(P<0.05)。与sh-Con组和Wt组比较,CK18表达降低能促进E-cadherin表达,抑制vimentin表达(P<0.05)。结论 CK18基因沉默能有效抑制人乳腺癌BT549细胞的增殖、运动、侵袭,诱导细胞的凋亡,并阻滞细胞周期;CK18还可能通过诱导EMT发生参与乳腺癌BT549细胞的侵袭转移过程。(本文来源于《天津医药》期刊2019年05期）
许士高[2]（2019）在《hTERT及EZH2-shRNA双调控条件复制型腺病毒对前列腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响》一文中研究指出去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)较激素敏感性前列腺癌(hormone-sensitive prostate cancer,HSPC)治疗难度大,且预后较差,因此有必要开拓新的治疗方法,而基因疗法则是目前较为热门的治疗恶性肿瘤的方法,引起科研工作者的广泛关注。基因疗法是将目的基因以合适的载体导入到靶细胞中,修复相关的基因缺陷,达到治疗肿瘤的目的。本研究旨在构建一种受人端粒酶逆转录酶启动子(human telomerase catalytic subunit,hTERT)和 zeste 增强子同源物 2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)-短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)(以下简称EZH2-shRNA)双调控的条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAds,以下简称腺病毒),通过靶向抑制 CRPC细胞增殖及侵袭能力,从而实现安全、高效、稳定治疗CRPC的目的,为CRPC的精准基因治疗提供实验基础。目的:检测人前列腺组织中EZH2蛋白的表达水平。通过构建由hTERT和EZH2-shRNA双调控的腺病毒,探讨腺病毒对CRPC细胞增殖及侵袭能力的影响,为CRPC的精准基因治疗提供实验基础。方法:获取CRPC、良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)、HSPC患者的前列腺组织样本,采用免疫组织化学方法检测3组样本中EZH2蛋白的表达水平。构建一种由hTERT和EZH2-shRNA双调控的腺病毒,设计两条shRNA(即3hRNA1、shRNA2),用增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测含两种不同shRNA的腺病毒对PC-3细胞增殖能力的干扰效果,筛选出干扰效果较好的shRNA进行后续实验。使用干扰效果较好的腺病毒去转染人肺腺癌A549细胞,通过镜下观察细胞被转染后的荧光图像,观察腺病毒是否构建成功。使用筛选出的腺病毒去转染PCa细胞(PC-3及DU145)。CCK-8实验及侵袭实验(Transwell)检测腺病毒转染前后PC-3和DU145细胞的增殖和侵袭能力。Western blot实验来检测腺病毒转染前后PC-3与DU145细胞中EZH2、CCND1、Ki-67及E-cadherin蛋白的表达。结果:1.免疫组化方法检测显示:与BPH患者标本相比,EZH2蛋白在HSPC和CRPC患者标本中表达明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,在不同类型的PCa标本中(CRPC与HSPC),对EZH2蛋白的表达量进行评分,EZH2评分较低部分中HSPC占比较大,而EZH2评分较高部分中则CRPC占比较大。两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.基因测序证明单克隆抗体中shRNA及hTERT序列的正确性,表明单克隆载体构建成功。CCK-8法检测shRNA1和shRNA2对PC-3细胞增殖的干扰效果,结果显示,shRNA2抑制PC-3细胞增殖的效率更高。同时,我们使用携带EZH2-shRNA2及hTERT基因的腺病毒去干扰A549细胞,24 h、48 h、72 h后的荧光分析显示转染的细胞随时间逐渐增加,间接表明我们成功构建了腺病毒载体。3.Transwell侵袭实验结果表明,实验组(经腺病毒转染的细胞组)培养48 h后可显着抑制PCa细胞(PC-3和DU145)的侵袭能力,表明腺病毒对PCa细胞的侵袭能力具有显着抑制作用。实验组与对照组(未经腺病毒转染的细胞组)相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.CCK-8结果显示,在PC-3及DU145细胞中,与未经转染的细胞相比,腺病毒转染PCa细胞后能显着抑制细胞的增殖能力(P<0.05)。5.Western blot结果显示,当EZH2蛋白的表达被抑制时,Ki-67及CCND1的表达也相应下降。相反,E-cadherin的表达增加。结论:1.EZH2蛋白在人前列腺癌组织中表达水平增高,且CRPC组织中EZH2蛋白较HSPC中表达上调明显。2.比较免疫组化检测中EZH2蛋白强度评分,EZH2蛋白在HSPC与CRPC组织中表达差异明显。3.成功的构建了能够在PCa细胞中稳定表达的CRAds。4.hTERT及EZH2-shRNA双调控的CRAds能够抑制人PCa细胞的增殖及侵袭能力,表现出显着的抗肿瘤作用。5.EZH2蛋白表达水平下调引起Ki-67、CCND1蛋白表达水平下调,同时E-cadherin蛋白表达水平上调。(本文来源于《扬州大学》期刊2019-04-05）
刘杰[3]（2019）在《慢病毒介导的GTPBP2基因沉默对非小细胞肺癌细胞系迁移、侵袭和增殖能力及相关蛋白的影响》一文中研究指出目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,死亡率在各类恶性肿瘤排名第一,2018年11月发表在CA杂志上的结果显示肺癌仍然是全球最常见的恶性肿瘤,发病率和死亡率不容乐观,其中肺癌在所发生的肿瘤中占11.6%,也是癌症死亡的主要原因,占癌症总死亡人数的18.4%,这些数据均表明肺癌具有高发病率和高死亡率的特征。其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的75-85﹪。目前肺癌主要采取以手术为主,放化疗为辅的综合治疗,尽管在肿瘤学的研究中取得了重要成果,但复发和转移仍是导致患者治疗失败和死亡的主要原因,且NSCLC的5年生存率不超过15%,因此寻找有效的治疗靶点成为治疗肺癌的突破口之一。GTP结合蛋白(guanosine 5’-triphosphate-binding proteins,GTPBPs)是一类具有信号转导作用的蛋白,具有GTP水解酶活性。GTP结合蛋白在细胞信号传递、细胞骨架调节、蛋白质合成等活动中发挥重要作用。GTPBP2是G蛋白超家族的成员之一,其可与信号转导通路上的组成成分相互作用,继而可能参与肿瘤的发生发展。目前GTPBP2基因的表达与肿瘤的关系在国内外文献中还未见报道,在人类肺癌中的表达情况尚未研究。方法:本实验采用Western blot筛选高表达GTPBP2蛋白的细胞系。应用慢病毒载体介导的RNAi技术,沉默GTPBP2基因,并用Western blot和real timePCR检测沉默效果。细胞划痕实验、transwell实验和CCK8检测GTPBP2基因沉默后细胞迁移和增殖能力的变化。Western blot检测GTPBP2基因沉默后细胞迁移、侵袭和增殖相关蛋白的表达变化及Wnt/β-catenin信号通路上的相关蛋白,近一步验证GTPBP2对非小细胞肺癌细胞系的生物学功能。结果:GTPBP2蛋白在A549细胞系中表达量高于其他细胞系;沉默GTPBP2基因后的A549细胞迁移能力较阴性对照组下降;沉默GTPBP2基因后A549细胞的侵袭能力较阴性对照组明显下降;沉默GTPBP2基因后的A549细胞的增殖能力低于阴性对照组。结论:GTPBP2在A549中高表达,并与肿瘤细胞的迁移、侵袭及增殖功能相关。GTPBP2可能与肺非小细胞肺癌的发生、发展有关。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
庄万传,吴庆运,孟凡静,徐开林[4]（2018）在《携带CUEDC1基因的慢病毒载体的构建及其对MOLT-4细胞株增殖和集落形成能力的影响》一文中研究指出目的:构建过表达人CUEDC1的慢病毒载体pCDH-CUEDC1,利用慢病毒介导的感染获得稳定表达重组质粒的MOLT-4细胞,分析过表达CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。方法:利用RT-PCR的方法获得CUEDC1全长片段,将CUEDC1 DNA片段酶切回收后克隆至慢病毒转移质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPT2A-Puro(以下简称pCDH),获得pCDH-CUEDC1慢病毒重组质粒。经叁质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系MOLT-4,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的CUEDC1 mRNA和CUEDC1的表达。应用CCK-8法和集落形成试验测定CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。结果:经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带CUEDC1的重组慢病毒载体;病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP阳性细胞。实时定量PCR及Western blot证实,病毒感染后CUEDC1的mRNA和蛋白表达上调;CCK-8法及集落形成试验显示,过表达CUEDC1促进MOLT-4细胞的增殖和集落形成能力,与对照组相比,均有统计学差异(P<0.05)。结论:成功构建了表达CUEDC1的慢病毒载体,CUEDC1可以促进MOLT-4细胞的增殖和集落形成能力。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2018年05期）
王博雅,刘波,李俊峰,罗艳玲[5]（2017）在《莫诺苷对慢病毒载体转染抑制人胚胎神经干细胞增殖能力的影响》一文中研究指出目的人胚胎神经干细胞(Human embryonic neural stem cell,he NSC)具有自我更新能力和多向分化潜能,莫诺苷具有促进脑缺血再灌注损伤神经功能恢复的作用,但其对he NSC的研究未见报道。方法本研究建立慢病毒载体转染he NSC模型,给予100μmol/L莫诺苷作用48 h,观察对干细胞增殖的影响。结果与正常细胞比较,转染慢病毒载体后,he NSC Ki67+细胞数量以及Brd U+细胞数量均显着下降(P<0.01,P<0.001);而与莫诺苷共孵育后,转染慢病毒载体的he NSC Ki67+细胞数量以及Brd U+细胞数量均显着增加(P<0.05,P<0.001)。结论慢病毒载体转染能抑制he NSC增殖能力,而莫诺苷能显着改善慢病毒载体引起的细胞增殖能力下降。(本文来源于《实验动物科学》期刊2017年06期）
张峰[6]（2017）在《慢病毒介导的CRYAB基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖和迁移能力的影响》一文中研究指出目的本研究采用慢病毒介导的RNA干扰技术,通过体外实验研究CRYAB(alphaβ-crystallin,晶状体蛋白αβ)基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖与迁移能力的影响。方法1.构建靶向CRYAB基因特异性shRNA慢病毒载体并转染人胃癌细胞SGC-7901细胞株,荧光显微镜观察拍照检测转染效率;2.Real-time PCR和Western Blotting方法检测沉默CRYAB基因后CRYAB的mRNA和蛋白质水平;3.CCK-8法与细胞克隆球形成实验检测沉默CRYAB基因后细胞的增殖活性;4.Transwell迁移实验与细胞划痕实验检测沉默CRYAB基因后细胞的迁移能力。结果1.荧光显微镜观察结果显示,感染复数(MOI)值为20的SGC-7901细胞的病毒转染率大于80%;2.Real-time PCR与Western Blotting结果显示,成功转染sh RNA-CRYAB胃癌细胞SGC-7901细胞株。慢病毒转染72h后,与sh-ctrl组比较,sh-CRYAB组CRYAB mRNA水平减少90%;与sh-ctrl组比较,sh-CRYAB组CRYAB的蛋白表达显着降低(P<0.001);3.细胞克隆球形成实验显示,SGC7901细胞感染shRNA慢病毒的细胞克隆数明显较感染对照慢病毒组的克隆数少,两组比较具有统计学意义(P<0.05);4.CCK-8检测结果显示,SGC-7901细胞的增殖能力于CRYAB基因沉默之后显着减弱。与sh-ctrl组相比,sh-CRYAB组细胞增长速度变缓,在第4天、第5天增殖能力降低(P<0.05,P<0.01)。5.Transwell小室细胞迁移实验结果显示,转染CRYAB shRNA SGC-7901细胞的迁移能力明显下降。sh-CRYAB组平均穿膜细胞数是(49.5±2.0),sh-ctrl组平均穿膜数为(370.0±2.9),两组数据具有统计学差异性(P<0.01);6.细胞划痕实验结果显示,sh-ctrl组划痕基本被迁移的细胞覆盖,sh-CRYAB组的划痕仍比较清楚,测量两组0、24、48、72 h的相对空白面积,sh-CRYAB组细胞相对空白面积在24、48、72 h小于sh-ctrl组(P<0.01)。结论shRNA-CRYAB慢病毒干扰载体对抑制CRYAB基因于胃癌细胞SGC-7901中发生机制具有显着作用,进一步使细胞增殖与迁移受到抑制。CRYAB有望成为肿瘤基因治疗的新靶向分子。(本文来源于《兰州大学》期刊2017-04-01）
王兴童,牛银杰,彭蔚宇,王丽廷,孟兴[7]（2016）在《鸭MHC基因型影响鸭肠炎病毒的体外增殖能力》一文中研究指出背景/目的:主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1、B2、B3和B4鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础,根据毗邻MHC I类分子的抗原转运相关蛋白(TAP)基因的多态性选育成功的四个纯系SPF鸭群,具有MHC单倍型的遗传学特征。利用体内攻毒试验,B3系雏鸭对重组鸭肠炎病毒(DEV)载体表达的禽流感疫苗免疫产生的血凝抑制(HI)抗体明显高于其它3个品系。利用源自B3系和B1系HBK鸭的原代鸭胚成纤维细胞(DEF),体外比较对鸭肠炎病毒的复制能力的差异,筛选适合水禽免疫遗传学研究的实验动物。方法:取13日龄B1和B3系鸭胚各2枚,分别制备鸭胚成纤维细胞(DEF),将次代细胞各培养至2块96孔细胞培养板。将DEV疫苗株C-KCE同DEV人工感染鸭血清均2倍倍比稀释后,将不同浓度的血清和病毒棋盘法混合接种于细胞板。96 h后逐孔观察和比较DEV特异性致病变效应(CPE)。选择相同稀释度但病变程度有差异的孔(共8个)进一步进行实时荧光定量PCR,检测DEV拷贝数。结果:与无病毒或血清的对照孔相比,所有接种了病毒的细胞孔都表现出圆缩、空泡变性和脱落的特征性病变。血清抗体和病毒相同浓度时,B3系DEF出现的CPE比B1的严重,且被检孔的平均病毒拷贝数(8.38E×105)大于B1(1.89E×105)品系。被相同浓度血清抗体中和时,B3系的病毒含量更高,即增殖更快。结论:鸭的MHC基因型影响鸭肠炎病毒的复制能力,并且B3系HBK鸭比B1系更敏感,是开展水禽病免疫遗传学研究的良好模式动物。(本文来源于《第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编》期刊2016-11-04）
王剑,赵龙[8]（2016）在《慢病毒介导的CRYAB基因沉默对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响》一文中研究指出目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,通过体外实验探讨CRYAB基因沉默对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和迁移能力的影响。方法构建靶向CRYAB基因特异性sh RNA慢病毒载体并转染人骨肉瘤细胞MG-63细胞株,利用Real-time PCR和Western Blotting技术分别从m RNA和蛋白质水平检测其表达的变化。CCK-8法和细胞克隆实验检测沉默CRYAB基因后细胞的增殖能力,Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力。结果 Real-time PCR和Western Blotting结果均表明,成功建立稳定转染sh RNA-CRYAB骨肉瘤细胞MG-63细胞株。CCK8实验结果显示sh RNA-CRYAB病毒转染组与阴性对照组相比细胞的增殖能力显着降低(P<0.05),尤其在第四、五、六和第七天表现更明显;细胞克隆实验结果显示,sh RNA-CRYAB病毒转染组和阴性对照组的克隆形成率分别为5.2%和26.0%,具有显着性差异(P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示,sh RNA-CRYAB病毒转染组的细胞迁移率明显低于阴性对照组(P<0.01)。结论 sh RNA-CRYAB慢病毒干扰载体能有效抑制CRYAB基因在人骨肉瘤细胞MG-63中表达,进而抑制细胞增殖和迁移。(本文来源于《卫生职业教育》期刊2016年16期）
沈云龙,安泰学,罗巧灵,李和珍,杨勇[9]（2016）在《慢病毒介导shRNA抑制垂体腺瘤PTTG基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响》一文中研究指出【目的】观察慢病毒介导的sh RNA对GH3和At T20型垂体腺瘤中垂体肿瘤转化基因(PTTG)表达的抑制作用,以及对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制探讨。【方法】筛选最佳抑制效果的干扰序列构建PTTG基因sh RNA的慢病毒表达载体,转染GH3和At T20型垂体腺瘤细胞。流式细胞仪分析细胞转染效率,RT-PCR和Western blot检测细胞PTTG基因m RNA和蛋白的表达水平,MTT和Ed U法分别检测靶向PTTG的sh RNA对肿瘤细胞增殖生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期变化。Transwell小室检测细胞侵袭能力的变化,基因芯片筛查干扰后的基因表达谱差异并进行生物信息学分析。【结果】细胞转染表达PTTG基因sh RNA的慢病毒载体后,能显着抑制肿瘤细胞PTTGm RNA和蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P<0.05),细胞的增殖能力受到明显抑制,且增殖抑制效应具有时间依赖性;细胞生长显着变慢,G0/G1期细胞比例显着增高,克隆形成能力下降,细胞侵袭能力也显着减弱,均与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。PI3K等信号通路的基因表达也发生显着变化。【结论】慢病毒介导sh RNA沉默PTTG基因表达可能是通过对PI3K信号通路的调控,抑制了GH3和At T20垂体腺瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的体外增殖和侵袭能力。(本文来源于《中山大学学报(医学科学版)》期刊2016年04期）
刘良兵[10]（2015）在《慢病毒介导的结肠癌转移相关基因1过表达对膀胱癌T24细胞增殖侵袭能力以及对肝细胞生长因子信号通路的影响》一文中研究指出目的:观察结肠癌转移相关基因1(MACC1)对膀胱癌细胞株T24增殖、侵袭能力以及对肝细胞生长因子信号通路(HGF/c-Met)的影响。方法:构建靶向过表达MACC1基因的慢病毒载体LV-MACC1-GFP,感染膀胱癌T24细胞株,经过筛选,建立稳定过表达MACC1基因的膀胱癌T24细胞株。通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法(western blotting)分别检测MACC1、HGF、c-Met基因mRNA与蛋白表达量,噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell体外细胞侵袭实验分别研究稳定过表达MACC1基因对细胞增殖和迁移的影响。结果:与阴性对照组相比,实时荧光定量PCR与western blotting证实,慢病毒LV-MACC1-GFP组MACC1、HGF、c-Met mRNA与蛋白表达量皆显着升高,Transwell细胞侵袭实验显示LV-MACC1-GFP组细胞迁移能力显着增强(P<0.05)。结论:慢病毒介导稳定过表达MACC1基因能使膀胱癌T24细胞株的增殖能力及侵袭能力增强,活化HGF/c-Met通路。(本文来源于《微创泌尿外科杂志》期刊2015年06期）
病毒增殖能力论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)较激素敏感性前列腺癌(hormone-sensitive prostate cancer,HSPC)治疗难度大,且预后较差,因此有必要开拓新的治疗方法,而基因疗法则是目前较为热门的治疗恶性肿瘤的方法,引起科研工作者的广泛关注。基因疗法是将目的基因以合适的载体导入到靶细胞中,修复相关的基因缺陷,达到治疗肿瘤的目的。本研究旨在构建一种受人端粒酶逆转录酶启动子(human telomerase catalytic subunit,hTERT)和 zeste 增强子同源物 2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)-短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)(以下简称EZH2-shRNA)双调控的条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAds,以下简称腺病毒),通过靶向抑制 CRPC细胞增殖及侵袭能力,从而实现安全、高效、稳定治疗CRPC的目的,为CRPC的精准基因治疗提供实验基础。目的:检测人前列腺组织中EZH2蛋白的表达水平。通过构建由hTERT和EZH2-shRNA双调控的腺病毒,探讨腺病毒对CRPC细胞增殖及侵袭能力的影响,为CRPC的精准基因治疗提供实验基础。方法:获取CRPC、良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)、HSPC患者的前列腺组织样本,采用免疫组织化学方法检测3组样本中EZH2蛋白的表达水平。构建一种由hTERT和EZH2-shRNA双调控的腺病毒,设计两条shRNA(即3hRNA1、shRNA2),用增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测含两种不同shRNA的腺病毒对PC-3细胞增殖能力的干扰效果,筛选出干扰效果较好的shRNA进行后续实验。使用干扰效果较好的腺病毒去转染人肺腺癌A549细胞,通过镜下观察细胞被转染后的荧光图像,观察腺病毒是否构建成功。使用筛选出的腺病毒去转染PCa细胞(PC-3及DU145)。CCK-8实验及侵袭实验(Transwell)检测腺病毒转染前后PC-3和DU145细胞的增殖和侵袭能力。Western blot实验来检测腺病毒转染前后PC-3与DU145细胞中EZH2、CCND1、Ki-67及E-cadherin蛋白的表达。结果:1.免疫组化方法检测显示:与BPH患者标本相比,EZH2蛋白在HSPC和CRPC患者标本中表达明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,在不同类型的PCa标本中(CRPC与HSPC),对EZH2蛋白的表达量进行评分,EZH2评分较低部分中HSPC占比较大,而EZH2评分较高部分中则CRPC占比较大。两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.基因测序证明单克隆抗体中shRNA及hTERT序列的正确性,表明单克隆载体构建成功。CCK-8法检测shRNA1和shRNA2对PC-3细胞增殖的干扰效果,结果显示,shRNA2抑制PC-3细胞增殖的效率更高。同时,我们使用携带EZH2-shRNA2及hTERT基因的腺病毒去干扰A549细胞,24 h、48 h、72 h后的荧光分析显示转染的细胞随时间逐渐增加,间接表明我们成功构建了腺病毒载体。3.Transwell侵袭实验结果表明,实验组(经腺病毒转染的细胞组)培养48 h后可显着抑制PCa细胞(PC-3和DU145)的侵袭能力,表明腺病毒对PCa细胞的侵袭能力具有显着抑制作用。实验组与对照组(未经腺病毒转染的细胞组)相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.CCK-8结果显示,在PC-3及DU145细胞中,与未经转染的细胞相比,腺病毒转染PCa细胞后能显着抑制细胞的增殖能力(P<0.05)。5.Western blot结果显示,当EZH2蛋白的表达被抑制时,Ki-67及CCND1的表达也相应下降。相反,E-cadherin的表达增加。结论:1.EZH2蛋白在人前列腺癌组织中表达水平增高,且CRPC组织中EZH2蛋白较HSPC中表达上调明显。2.比较免疫组化检测中EZH2蛋白强度评分,EZH2蛋白在HSPC与CRPC组织中表达差异明显。3.成功的构建了能够在PCa细胞中稳定表达的CRAds。4.hTERT及EZH2-shRNA双调控的CRAds能够抑制人PCa细胞的增殖及侵袭能力,表现出显着的抗肿瘤作用。5.EZH2蛋白表达水平下调引起Ki-67、CCND1蛋白表达水平下调,同时E-cadherin蛋白表达水平上调。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒增殖能力论文参考文献
[1].张青,黄钱,张春燕,刘晓燕,曾凡才.慢病毒介导CK18基因沉默对人乳腺癌BT549细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响[J].天津医药.2019
[2].许士高.hTERT及EZH2-shRNA双调控条件复制型腺病毒对前列腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响[D].扬州大学.2019
[3].刘杰.慢病毒介导的GTPBP2基因沉默对非小细胞肺癌细胞系迁移、侵袭和增殖能力及相关蛋白的影响[D].中国医科大学.2019
[4].庄万传,吴庆运,孟凡静,徐开林.携带CUEDC1基因的慢病毒载体的构建及其对MOLT-4细胞株增殖和集落形成能力的影响[J].中国实验血液学杂志.2018
[5].王博雅,刘波,李俊峰,罗艳玲.莫诺苷对慢病毒载体转染抑制人胚胎神经干细胞增殖能力的影响[J].实验动物科学.2017
[6].张峰.慢病毒介导的CRYAB基因沉默对胃癌细胞SGC-7901增殖和迁移能力的影响[D].兰州大学.2017
[7].王兴童,牛银杰,彭蔚宇,王丽廷,孟兴.鸭MHC基因型影响鸭肠炎病毒的体外增殖能力[C].第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编.2016
[8].王剑,赵龙.慢病毒介导的CRYAB基因沉默对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响[J].卫生职业教育.2016
[9].沈云龙,安泰学,罗巧灵,李和珍,杨勇.慢病毒介导shRNA抑制垂体腺瘤PTTG基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响[J].中山大学学报(医学科学版).2016
[10].刘良兵.慢病毒介导的结肠癌转移相关基因1过表达对膀胱癌T24细胞增殖侵袭能力以及对肝细胞生长因子信号通路的影响[J].微创泌尿外科杂志.2015