论文题目: 补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其相关基因表达的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 中医妇科学
作者: 夏天
导师: 韩冰
关键词: 卵巢功能,颗粒细胞,增殖,分泌,环磷酸腺苷,卵泡刺激素受体,类胰岛素样生长因子,实时荧光定量
文献来源: 天津中医学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:补肾调冲方是导师韩冰教授根据中医理论及多年的临床实践所创立的,具有滋补肝肾、平衡阴阳、疏达肝气、调理冲任气血等功能,适用于肾虚、冲任失调所致的一系列卵巢功能失调性疾患的方药。本研究即以补肾调冲方作为干预手段,以体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞作为研究对象,运用直接给药法及血清药理学两种方法观察补肾调冲方对卵巢颗粒细胞增殖与甾体激素分泌功能的影响,并进一步研究中药对卵泡刺激素受体（FSHR）、类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）、类胰岛素样生长因子-1（IGF-1）等基因表达的影响,从而在卵巢一级水平探讨补肾调冲方调节卵巢功能的分子生物学机制,为补肾调冲方在临床上的推广应用提供理论依据。 方法:制备原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞,预培养24小时后,直接加入FSH（50ng/ml）和/或不同浓度的补肾调冲方（100、10、1、0.1 μg/ml）,同时根据血清药理学方法,用6周龄的未成年SD大鼠制备FSH及大、中、小剂量补肾调冲方含药血清,并设空白血清组,分别加入颗粒细胞培养体系中。细胞培养48小时后,用3H—TdR掺入法及流式细胞术测定颗粒细胞的增殖变化及细胞周期分布,用放免法检测细胞培养液中E2、P的含量以及细胞内cAMP的含量,并用半定量RT-PCR及实时荧光定量（Real-time）RT-PCR（SYBR GreenI）两种方法检测颗粒细胞FSHR、StAR、IGF-1 mRNA的表达量。 结果:1.补肾调冲方直接给药对颗粒细胞的作用:①可明显增加3H—TdR掺入颗粒细胞DNA中的数量;②促使颗粒细胞由G0/G1期向S期转变,并可提高PI指数;③增加颗粒细胞E2、P的分泌量;④增加颗粒细胞中cAMP的含量;⑤补肾调冲方对颗粒细胞增殖与分泌的作用在一定范围内随药物浓度的增大而增加,高浓度组与FSH作用相似;⑥补肾调冲方与FSH共同作用可进一步增强FSH促颗粒细胞增殖与分泌的作用,并进一步提高细胞内cAMP的含量。 2.补肾调冲方含药血清对颗粒细胞的作用:①明显促进基础状态下颗粒细胞的增殖与E2、P的分泌,提高细胞中cAMP的含量;②大、中剂量补肾调冲方含药血清促颗粒细胞增殖与分泌的作用相似,与FSH血清组均无明显差别,小剂量中药血清组作用稍弱;③高雄激素状态下,颗粒细胞增殖与E2、P分泌功能均受
论文目录:
中文摘要
英文摘要
英文缩写表
前言
课题研究概论
第一节 国内外研究进展
第二节 课题研究的目的及意义
第三节 工作假说
第四节 科研思路及技术路线
第五节 课题的研究基础及创新性
技术路线图
参考文献
实验研究
第一部分 补肾调冲方及其含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响
材料与方法
结果
一 补肾调冲方直接给药对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响
1．补肾调冲方直接给药对基础状态下颗粒细胞增殖与分泌的影响
2．补肾调冲方与FSH共同作用对颗粒细胞增殖与分泌的影响
二 补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响
1．补肾调冲方含药血清对基础状态下颗粒细胞增殖与分泌的影响
2．高雄激素状态下补肾调冲方含药血清对颗粒细胞增殖与分泌的影响
第二部分 补肾调冲方及其含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、StAR、IGF-1mRNA表达的影响
材料与方法
结果
半定量RT-PCR结果
Real-time RT-PCR结果
参考文献
第三部分 讨论
一 祖国医学对卵巢功能失调的认识
1．祖国医学关于“肾主生殖”的理论
2．“冲任学说”在卵巢功能调节中的应用
3．肾与冲任的关系
4．肝与冲任的关系
5．肝、肾、冲任在卵巢功能失调发病机理中的关系
二 补肾调冲法则的确立及其组方配伍意义
三 补肾调冲方直接给药对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能的影响
四 补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能的影响
五 Rear-time RT-PCR实时、定量检测方法
六 不同培养条件下补肾调冲方对颗粒细胞FSHR mRNA表达影响的差异
七 补肾调冲方对颗粒细胞StAR mRNA表达的上调作用
八 补肾调冲方可通过不同途径促进颗粒细胞IGF-1 mRNA的表达
九 补肾调冲方调节卵巢功能的多靶点、多途径的非线性作用机制
十 补肾调冲方在性腺轴中卵巢一级水平的调节作用
十一 本研究为“肾主生殖”、“冲任学说”提供新的理论依据
补肾调冲方促进卵巢颗粒细胞增殖与分泌的作用机制示意图
小结
参考文献
附1：中药血清药理学方法在本课题中的应用
附2：卵巢功能的局部调节
致谢
发布时间: 2005-09-15
参考文献
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