梅品种资源亲缘关系的RAPD和EST-SSR分析

论文摘要

梅（Prunus mume Sieb. et Zucc.）是重要的园艺经济树种,属于蔷薇科李属植物,东亚为主要栽培地区。梅按照用途分为果梅和花梅,原产于中国,历史悠久。梅在我国已有7000年以上的应用历史,栽培历史也有3000多年。尽管在实际应用与研究中有果梅和花梅之分,但是在植物学分类中果梅与花梅的分类是不存在的,都属于同一个属中的一个种或变种,即属于蔷薇科李属。梅拥有悠久的栽培历史和丰富的种质资源。对梅种质资源进行分类和亲缘关系的研究,有利于梅种质资源的收集、保存、鉴定、创新和合理利用。近年来分子标记在植物分类和亲缘关系分析等方面得到了广泛的应用。本文采用RAPD和EST-SSR两种标记方法,对不同来源的梅品种资源进行聚类和亲缘关系分析,本文重点对花梅进行了研究,主要结果如下：1.为更好地将RAPD技术应用于花梅品种资源的鉴定以及遗传基础的研究,本研究以16个花梅品种为试验材料,分别用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对PCR扩增产物进行检测并对检测结果进行了比较,结果表明PAGE检测出的谱带的总数量以及多态性谱带的数量均高于前者。根据2种电泳系统获得的标记信息构建的树状聚类图表明,PAGE检测的结果与花梅的分类情况基本一致。通过对随机挑选的25个片段进行克隆与测序的结果发现,25个片段都是对应引物的RAPD扩增产物。其中有4条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因纽上的非编码蛋白序列,而且还可以扩增编码蛋白序列。2.从100条RAPD引物中筛选出有效的23条引物对46份梅品种进行扩增,共检测出131条谱带,其中多态性谱带107条,多态性比率为81.7%。利用NTSYS软件和UPGMA聚类法对扩增结果进行了品种间相似系数的计算及聚类分析。结果表明：46个花梅和果梅品种的遗传相似系数为0.63～0.83,在相似系数为0.66处被分为5类,而花梅和果梅没有单独被分为两类。该研究结果进一步表明了花梅和果梅在遗传上是同一种植物,这与前人分别利用SSR与SNP两种标记的研究结果相一致。3.以54个花梅品种为研究材料,选用已报道的16对杏（Prunus armeniaca L.） EST-SSR引物和11对果梅EST-SSR引物对花梅进行PCR扩增,探索杏引1物在花梅中的通用性,并利用筛选出的9对果梅EST-SSR引物和在花梅中通用性强的8对杏EST-SSR引物对供试花梅品种进行亲缘关系分析。这些结果都表明了开发和建立不同物种间可通用的EST-SSR标记是可行且有应用价值的。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 縮略词
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 梅简介
• 1.1 梅的自然分布
• 1.2 梅花器官发育及结果特性
• 1.3 果梅与花梅品种分类系统研究
• 2 DNA分子标记
• 2.1 DNA分子标记概述
• 2.2 RAPD分子标记
• 2.3 EST-SSR技术
• 3 小结与展望
• 第二章 花梅RAPD扩增产物的不同电泳检测及其序列特征分析
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 PCR扩增结果比较
• 2.2 不同花梅品种的聚类分析结果比较
• 2.3 RAPD的PCR产物的序列特点
• 3 讨论
• 第三章 基于改良RAPD标记的花梅与果梅的亲缘关系分析
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 PCR扩增结果分析
• 2.2 梅品种间的聚类分析
• 3 讨论
• 第四章 利用杏和果梅EST-SSR引物对花梅进行亲缘关系分析
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 EST-SSR通用性
• 2.2 花梅EST-SSR PCR产物的带型分析
• 2.3 54个花梅品种间的亲缘关系分析
• 3 讨论
• 全文结论
• 创新点
• 参考文献
• 附录 本文中常用试剂及培养基的配置
• 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 致谢