褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

论文摘要

目的研究褐藻糖胶（fucoidan）对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,将对数生长期细胞随机分为对照组和不同浓度（100mg/L、300mg/L、500mg/L、1000mg/L）褐藻糖胶处理组,并以不同浓度褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色及琼脂糖凝胶电泳（DNA ladder）分析细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）,蛋白印迹试验（western blotting）检测褐藻糖胶处理组和对照组MCF-7细胞bcl-2和bax基因表达的变化。结果不同实验浓度的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P＜0.01）,并随其浓度增加,抑制率逐渐增大;Hoechst 33258荧光染色显示细胞内可见明显的凋亡形态学改变:染色质固缩、形成新月形帽状结构以及凋亡小体出现,随褐藻糖胶浓度增大,细胞凋亡数增加;琼脂糖凝胶电泳可见300mg/L、500mg/L和1000mg/L褐藻糖胶处理组出现明显的、凋亡特有的DNA梯形条带;在褐藻糖胶存在下,bcl-2基因的mRNA和蛋白表达减少,而bax基因的mRNA和蛋白表达增加,bcl-2/bax比值下降（P＜0.05）。结论褐藻糖胶呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其诱导凋亡的作用机制是下调bcl-2基因和上调bax基因的表达。褐藻糖胶有望成为一种新型的海洋抗肿瘤药物。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1.1 细胞株及培养体系
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 材料与仪器
• 第二章 实验方法
• 2.1 细胞株及培养体系
• 2.2 实验分组及处理
• 2.3 实验流程
• 2.3.1 MTT法测细胞增殖
• 2.3.2 Hoechst 33258荧光染色检测凋亡
• 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳
• 2.3.4 RNA提取与RT-PCR
• 2.3.4.1 RNA提取
• 2.3.4.2 RT-PCR检测细胞bcl-2和bax mRNA表达水平
• 2.3.5 Western Blotting
• 2.4 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 褐藻糖胶对MCF-7细胞增殖的影响
• 3.1.1 褐藻糖胶对MCF-7细胞活力的影响
• 3.1.2 褐藻糖胶对MCF-7细胞的生长抑制作用
• 3.2 褐藻糖胶对MCF-7细胞凋亡的影响
• 3.2.1 Hoechst 33258荧光染色结果
• 3.2.2 琼脂糖凝胶电泳结果分析
• 3.3 褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡的机制
• 3.3.1 bcl-2、bax mRNA表达的变化
• 3.3.2 Bcl-2和Bax蛋白表达的变化
• 第四章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述及参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢