论文摘要
细胞凋亡是一种重要的生物学过程，在细胞生长发育以及对外界刺激的反应中有关键的作用。近几年人们对细胞凋亡的研究已经很多，但是其分子机制的研究仍很有限。本论文将FRET技术和荧光探针运用到细胞凋亡一些分子机制的研究中，并得到了初步但非常有意义的结果。本论文实验工作主要分三部分：第一部分的实验工作中，利用激光共聚焦扫描显微镜和荧光融合蛋白YFP-Bax、GFP-BimL以及线粒体标记荧光探针DsRed-Mit，在活细胞内观测生理条件下BimL和Bax的定位以及紫外照射后BimL和BaX的转位过程。实验结果显示，生理条件下，Bax均匀地分布在细胞浆和细胞核，BimL分布在胞浆；紫外照射诱导细胞凋亡过程中，BimL和Bax分别从胞浆转位到线粒体。因此，采用荧光融合蛋白和激光共聚焦显微镜技术观察蛋白定位变化，真实地反映了Bax和BimL在活细胞中的定位，为Bax和BimL的功能研究打下基础。第二部分的实验工作中，为了研究Bim激活Bax／Bak引起细胞凋亡的机制，利用激光共聚焦扫描显微镜，采用荧光共振能量转移技术在活细胞实时研究紫外照射后BimL和Bax两者的关系，实验结果显示，紫外照射诱导细胞凋亡过程中BimL转位到线粒体，并且BimL活性的抑制推迟了Bax的转位和随后发生的细胞凋亡，但是BimL没有直接激活Bax。我们的研究表明，BimL通过间接激活Bax参与紫外照射诱导的细胞凋亡。第三部分为了探讨红景天甙抑制Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的机理，利用30μM Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型，采用荧光共振能量转移技术在活细胞检测红景天甙对PC12细胞凋亡的抑制作用。实验结果显示，红景天甙剂量依赖性抑制Aβ25-35引起的细胞凋亡，提高细胞的存活率；红景天甙对caspase-3的活性有明显的抑制作用，而且Aβ25-35诱导细胞凋亡不依赖caspase-8的激活。这些结果提示抑制caspase-3活性是红景天甙抑制Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的机制之一。
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摘要ABSTRACT目录第一章 细胞凋亡1.1 Caspases与细胞凋亡1.2 线粒体与细胞凋亡1.2.1 线粒体孔道1.2.1.1 线粒体膜通透性转移孔道的开放1.2.1.2 线粒体外膜特异性孔道的形成1.2.1.3 线粒体电子传递链与活性氧的作用1.2.2 凋亡因子1.2.2.1 细胞色素 C—凋亡起始因子1.2.2.2 AIF—凋亡诱导因子1.2.2.3 Smac/DIABLO蛋白1.2.3 Bcl-2家族蛋白1.3 细胞凋亡的信号转导途径1.3.1 死亡受体途径（外源性途径）1.3.2 线粒体途径1.3.3 内质网途径1.4 结语第二章 激光共聚焦扫描显微镜和荧光共振能量转移技术及其应用的简介2.1 激光共聚焦显微镜的原理及应用2.1.1 激光共焦扫描显微镜的原理2.1.2 激光共聚焦扫描显微镜系统在生物、医学中的应用2.1.2.1 细胞内离子分析2.1.2.2 病变细胞的研究2.1.2.3 癌细胞间通讯研究2.2 荧光共振能量转移（FRET）技术的简介第三章 利用激光共聚焦显微镜观察凋亡过程中凋亡蛋白亚细胞定位的改变3.1 引言3.2 材料与方法3.2.1 材料3.2.2 方法3.2.2.1 GFP-BimL质粒构建3.2.2.2 细胞培养3.2.2.3 瞬时转染3.2.2.4 紫外线照射3.2.2.5 激光共聚焦扫描显微镜设置3.3 结果3.3.1 重组质粒pEGFP-BimL的构建及鉴定3.3.2 紫外照射诱导细胞凋亡中Bax转位到线粒体3.3.3 紫外照射诱导的细胞凋亡中BimL转位到线粒体3.4 讨论第四章 利用 FRET技术研究紫外照射诱导细胞凋亡中 BimL和 Bax两者的关系4.1 引言4.2 材料与方法4.2.1 材料4.2.2 方法4.2.2.1 细胞培养4.2.2.2 瞬时转染4.2.2.3 激光共聚焦扫描显微镜成像4.3 结果4.3.1 紫外照射诱导细胞凋亡中BimL和 Bax的动态关系4.3.2 JNK活性的抑制阻碍了BimL的转位，推迟了Bax的转位和随后发生的细胞凋亡4.4 讨论25-35诱导PC12细胞凋亡的抑制作用'>第五章 利用FRET技术在活细胞内研究红景天甙对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的抑制作用5.1 引言5.2 材料和方法5.2.1 材料5.2.1.1 药物和试剂5.2.1.2 仪器5.2.2 方法5.2.2.1 质粒5.2.2.2 细胞培养和药物处理5.2.2.3 Cell Counting Kit-8测定不同浓度红景天甙的细胞毒性25-35处理PC12细胞的存活率'>5.2.2.4 Cell Counting Kit-8测定红景天甙提高Aβ25-35处理PC12细胞的存活率5.2.2.5 细胞形态变化的观测5.2.2.6 Hoechst33342染色5.2.2.7 瞬时转染25-35处理细胞和激光共聚焦扫描显微镜成像'>5.2.2.8 30μM Aβ25-35处理细胞和激光共聚焦扫描显微镜成像5.2.3 统计学分析5.3 结果25-35的神经毒性'>5.3.1 红景天甙抑制 Aβ25-35的神经毒性5.3.1.1 不同浓度红景天甙的细胞毒性25-35处理 PC12细胞的存活率'>5.3.1.2 红景天甙提高 Aβ25-35处理 PC12细胞的存活率25-35诱导 PC12细胞凋亡的形态改变'>5.3.1.3 红景天甙抑制 Aβ25-35诱导 PC12细胞凋亡的形态改变25-35诱导caspase-3活性的动态检测'>5.3.2 Aβ25-35诱导caspase-3活性的动态检测25-35诱导caspase-3活性的动态检测'>5.3.3 红景天甙抑制 Aβ25-35诱导caspase-3活性的动态检测25-35诱导 PC12细胞凋亡不依赖caspase-8的激活'>5.3.4 Aβ25-35诱导 PC12细胞凋亡不依赖caspase-8的激活5.4 讨论第六章 展望结束语参考文献发表论文致谢
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标签：细胞凋亡论文; 紫外照射论文; 红景天甙论文;
