论文摘要
主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）基因是一种编码细胞表面糖蛋白的异二聚体,是高度多态的基因,且某些基因型与生物体抗病力存在一定的相关关系。本研究以草鱼为对象,分别用柱状黄杆菌和嗜水气单胞菌进行攻毒实验,运用PCR-SSCP分型技术与测序法分析了抗病鱼群和易感鱼群的MH-DAB基因外显子2的多态性及多态性与鱼体抗病力之间的关系,并运用实时荧光定量PCR检测草鱼在攻毒后不同时间点MH-DAB基因mRNA的组织表达变化情况,结果如下：1.首次克隆得到了草鱼MH-DAB等位基因的完整外显子2,大小为276bp,共发现8个新等位基因,分别命名为Ctid-DAB*0101、Ctid-DAB*0102、Ctid-DAB*0201、Ctid-DAB*0202、Ctid-DAB*0301、Ctid-DAB*0302、Ctid-DAB*0401和Ctid-DAB*0402。2.对草鱼MH-DAB基因与其它物种MHCⅡB基因的进化树进行分析,结果表明草鱼MH-DAB基因与费吉马鮁、高体鰟鮍等鲤科鱼类亲缘关系最近,与鲤科鱼外的硬骨鱼如鲑科和鲈形目鱼类等的关系较远,与软骨鱼护士鲨和哺乳动物的关系最远。3.分别用柱状黄杆菌和嗜水气单胞菌对草鱼进行攻毒实验,攻毒柱状黄杆菌的草鱼共发现MH-DAB基因的8种基因型和6个等位基因,其中基因型AA（Ctid-DAB*0101/*0101）、DD（Ctid-DAB*0102/*0102）、EE （Ctid-DAB*0401/*0401）、DE（Ctid-DAB*0102/*0401）和等位基因A（Ctid-DAB*0101）、D （Ctid-DAB*0102）、E（Ctid-DAB*0401）、为抗病鱼和易感鱼群共享；基因型BB （Ctid-DAB*0201/*0201）、AB（Ctid-DAB*0101/*0201）、CC（Ctid-DAB*0301/*0301）、DF（Ctid-DAB*0102/*0202）和等位基因B（Ctid-DAB*0201）、C（Ctid-DAB*0301）、F （Ctid-DAB*0202）只出现在抗病鱼群中；基因型AA（Ctid-DAB*0101/*0101）、BB （Ctid-DAB*0201/*0201）、EE（Ctid-DAB*0401/*0401）、DE （Ctid-DAB*0102/*0401）和等位基因A（Ctid-DAB*0101）、B（Ctid-DAB*0201）、E （Ctid-DAB*0401）在抗病鱼群的分布显著高于在易感鱼群的分布（P<0.01）。攻毒嗜水气单胞菌的草鱼群共发现5种基因型和4个等位基因,其中基因型AA（Ctid-DAB*0101/*0101）、HH（Ctid-DAB*0402/*0402）、GG（Ctid-DAB*0302/*0302）、EE（Ctid-DAB*0401/*0401）和所有等位基因是抗病鱼和易感鱼群共有的,而基因型AH（Ctid-DAB*0101/*0402）只出现在易感鱼中；基因型AA（Ctid-DAB*0101/*0101）和等位基因A（Ctid-DAB*0101）在易感鱼群的分布极显著高于在抗病鱼群的分布（P<0.01）。4.对正常草鱼组织表达研究表明,MH-DAB基因较强表达于脑、肌肉、脾、皮肤和腮,中等表达于头肾和小肠,较低表达于心脏和肝脏。以正常草鱼MH-DAB基因表达为对照组,草鱼在感染柱状黄杆菌2d后,DAB基因在肝脏、心脏、头肾、胃、小肠和肌肉的表达量下降,其中肝的表达量仅为对照组的1/2左右,而小肠的表达显著低于对照组（P<0.05）,仅为其1/3；在脾、腮和皮肤的表达量略有上升。感染15d后,DAB基因在胃和小肠的表达略低于对照组,其余组织的表达量均高于对照组,其中皮肤的表达量均为对照的2倍（P<0.05）。5.嗜水气单胞菌攻毒后,草鱼MH-DAB基因的表达量变化很大。以Oh的表达量为对照,在攻毒6h后,MH-DAB基因在所有的组织中的表达均增加,且均显著高于对照（P<0.05）,其中肝脏的表达量达到最大值；’攻毒12h后,DAB基因在脾和腮的表达量上升,其中腮的表达量达到最大值,为对照的4.3倍（P<0.05）,其余组织的表达量均下降；攻毒24h后,DAB基因在脾和小肠的的表达量上升且达到最大值,分别为对照的12.4和5.2倍（P<0.05）,在其余组织的表达均为下降；攻毒48h后,DAB基因在头肾和肝脏的表达量上升,头肾的表达量达到最大值,为对照的4.26倍（P<0.05）,在脾、小肠和腮中表达量下降；在攻毒72-96h内,DAB基因在所有组织的表达均下降。