重金属铅和铬单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的初步建立

论文摘要

目的：制备Pb2＋和Cr3＋的单克隆抗体,并对其进行鉴定,初步建立起pb2＋和Cr3＋的间接竞争ELISA和胶体金免疫层析试纸条的方法,从而为构建一个重金属铅和铬离子的免疫学快速检测体系奠定基础。方法：分别利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-DTPA和i-EDTA将pb2＋和Cr3＋与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）偶联,制备完全抗原。并分别以Pb-DTPA-BSA和Cr-EDTA-BSA作为免疫原免疫BALB/c小鼠,同时分别利用上述两种双功能螯合剂将pb2＋和Cr3+与鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,得到Pb-DTPA-OVA和Cr-E DTA-OVA的偶联物作为检测抗原。应用杂交瘤技术制备抗pb2＋和Cr3＋的单克隆抗体。对两种重金属的单克隆抗体的效价、亚类、亲和力、特异性等方面进行鉴定,初步建立了检测重金属铅和铬的间接ELISA和胶体金免疫层析检测方法。结果：成功制备出两种不同重金属铅（Ⅱ）和铬（Ⅲ）的偶联物抗原；均获得三株稳定分泌Pb（Ⅱ）和Cr（Ⅲ）的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中在抗pb2＋的三个细胞株中2A11D11细胞株分泌的抗体的评价较好,其分泌的抗体属于IgG1,相对亲和力系数为3.34±0.24×109M-1,该抗体与载体蛋白OVA无交叉反应,特异性好,只与Fe3＋有近5%的交叉反应,与其他重金属离子的交叉反应均小于1%,初步建立了检测重金属铅的间接竞争ELISA方法的最低检测限（LOD）为0.1ng/mL, IC50为5ng/mL;胶体金试纸条的最低检测线（LOD）为50 ng/mL,显色时间在4min左右。在抗Cr3＋的三个细胞株中5G12C5细胞株分泌的抗体的评价较好,其分泌的抗体属于IgGl型。结论：成功制备了金属铅和铬的完全抗原,分别获得三株稳定分泌抗pb2＋和Cr3＋单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体亲和力高,特异性较好。利用制备的抗Pb2+的单克隆抗体初步建立的间接竞争ELISA检测方法和胶体金免疫层析检测方法,均达到国家的水质检测标准（GB／T 14848-93）,制备的抗Cr3＋的单克隆抗体也为进一步实现相关的免疫学检测方法的建立奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACTS
• 第一章 前言
• 1. 重金属污染主要的来源与危害
• 2. 重金属的污染来源及现状
• 2.1 土壤中重金属的污染来源及现状
• 2.2 水体中重金属的污染来源及现状
• 2.3 农产品中重金属的污染来源及现状
• 3. 重金属的检测方法
• 3.1 传统重金属检测方法
• 3.2 免疫学检测方法
• 4. 国内外研究现状
• 5. 本研究目的、意义
• 6. 技术路线图
• 第二章 重金属铅单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立
• 1. 材料与方法
• 1.1 主要仪器和试剂
• 1.2 主要溶液的配制方法
• 2. 实验方法
• 2+单克隆抗体的制备'>2.1 pb²⁺单克隆抗体的制备
• 2+单克隆抗体的鉴定'>2.2 pb²⁺单克隆抗体的鉴定
• 2+间接竞争ELISA方法的建立'>2.3 pb²⁺间接竞争ELISA方法的建立
• 2+胶体金试纸条免疫层析方法的建立'>2.4 pb²⁺胶体金试纸条免疫层析方法的建立
• 3. 实验结果
• 2+单克隆抗体的制备'>3.1 pb²⁺单克隆抗体的制备
• 3.2 单克隆抗体的鉴定
• 4. 重金属Pb竞争ELISA检测方法的初步建立
• 4.1 棋盘滴定选择抗原抗体最佳反应浓度
• 4.2 竞争条件优化
• 4.3 竞争ELISA标准抑制曲线
• 5. 重金属Pb胶体金免疫层析检测方法的初步建立
• 5.1 胶体金颗粒的TEM鉴定
• 5.2 胶体金颗粒与抗体蛋白偶联物的光谱鉴定
• 5.3 胶体金试纸条检测条件的优化
• 5.4 胶体金试纸条特异性的检测
• 5.5 胶体金试纸条灵敏度的检测
• 6. 讨论
• 2+与载体蛋白的偶联'>6.1 pd²⁺与载体蛋白的偶联
• 6.2 抗血清检测
• 6.3 腹水型单克隆抗体的制备及鉴定
• 6.4 胶体金免疫层析试纸条的制备
• 第三章 重金属铬单克隆抗体的制备
• 1. 材料与方法
• 1.1 主要仪器和试剂
• 1.2 主要溶液的配制方法
• 2. 实验方法
• 3+单克隆抗体的制备'>2.1 Cr³⁺单克隆抗体的制备
• 3+单克隆抗体的鉴定'>2.2 Cr³⁺单克隆抗体的鉴定
• 3. 实验结果
• 3+单克隆抗体的制备'>3.1 Cr³⁺单克隆抗体的制备
• 3.2. 单克隆抗体的鉴定
• 4. 讨论
• 4.1 人工抗原的制备
• 4.2 阳性细胞的筛选
• 4.3 腹水型单抗的效价
• 第四章 结论与展望
• 参考文献
• 在学期间发表论文清单
• 致谢