大豆异黄酮苷元的制备及抗阿尔茨海默病的活性研究

论文摘要

【目的】制定大豆异黄酮苷元制备工艺及建立质量控制方法;从细胞水平研究其对过氧化氢和β-淀粉样蛋白诱导的PC12细胞氧化损伤和神经毒性的保护作用;利用阿尔茨海默病模型小鼠（AD小鼠）,从体内实验研究其对AD小鼠学习记忆能力、抗氧化能力、神经递质水平、Aβ神经毒性和海马组织损伤的影响,探讨大豆异黄酮苷元抗阿尔茨海默病（AD）的作用及机理,为开发治疗AD的新药提供依据。【方法】（1）从豆粕中提取总大豆异黄酮;用酸水解法将大豆异黄酮苷转化成苷元,并纯化精制;建立高效液相色谱方法测定异黄酮苷元的含量的方法。（2）建立过氧化氢和Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型。显微镜观察细胞形态变化,并利用MTT法检测细胞存活率及LDH法检测细胞乳酸脱氢酶活力,研究大豆异黄酮苷元对PC12细胞的氧化损伤和Aβ神经毒性损伤的保护作用。（3）对AD模型小鼠用不同剂量的异黄酮苷元治疗,通过Y-迷宫实验和避暗试验观察AD小鼠学习记忆能力的改善;通过测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性、丙二醛（MDA）水平,研究AD小鼠抗氧化能力的改变;③通过测定乙酰胆碱酯酶活性,研究AD小鼠神经递质水平的变化;④通过测定β-分泌酶活力,研究AD小鼠抗Aβ神经毒性的作用;⑤通过脑组织切片,HE染色,观察对AD小鼠海马组织的保护情况。【结果】（1）本实验确定了一套大豆异黄酮苷元的制备工艺及质量控制方法,异黄酮苷元总含量为70.98%。其中3种苷元含量分别为:染料木素46.59%、大豆苷元21.215%、黄豆黄素3.175%。（2）用终浓度为150umol/L的H2O2和20umol/Aβ25-35处理正常培养的PC12细胞显微镜下观察,发现细胞受损较严重、细胞形态异常、数量显著减少,PC12细胞存活率为74.10%,与正常对照组相比明显降低（P<0.05）,培养液中LDH漏出率明显增大（P<0.01）;异黄酮苷元保护组（5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml）细胞贴壁良好,形态正常,活细胞较多,接近正常对照组,培养液中LDH漏出率比损伤组明显减小（P<0.05）。（3）对AD模型小鼠用异黄酮苷元治疗后,与模型组相比,用异黄酮苷元组的学习记忆能力提高（P<0.05）;血清中SOD、GSH-Px活力增加（P<0.05）;MDA含量下降（P<0.05）;AchE活力下降（P<0.05）、β-分泌酶活力活力下降（P<0.05）。【结论】（1）本实验中提取制备工艺可获得高纯度的大豆异黄酮苷元,工艺稳定可控,适合规模生产;（2）异黄酮苷元可显著改善H2O2和Aβ25-35诱导引起的PC12细胞形态改变,减轻细胞膜的损伤,提高神经细胞存活率,有较好的神经保护作用;（3）异黄酮苷元能改善AD模型小鼠学习记忆能力,增强抗氧化能力,降低AchE活力以保护神经递质、减轻Aβ神经毒,有良好的抗AD活性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1. 阿尔茨海默病及其发病机制
• 2. 治疗阿尔茨海默病药物研究进展
• 3. 大豆异黄酮研究进展
• 4. 快速老化小鼠
• 第一部分 异黄酮苷元的制备及含量测定
• 1. 实验材料和仪器
• 2. 异黄酮苷元的制备
• 3. 异黄酮苷元含量测定
• 4. 结果与讨论
• 5. 小结
• 第二部分 异黄酮苷元体外药理作用研究
• 第一章 异黄酮苷元抗氧化作用研究
• 1. 实验材料和仪器
• 2. 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 4. 小结
• 第二章 异黄酮苷元抗Aβ毒性的作用研究
• 1. 实验材料和仪器
• 2. 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 4. 小结
• 第三部分 异黄酮苷元防治阿尔茨海默病的作用研究
• 第一章 异黄酮苷元改善AD 小鼠学习记忆能力的研究
• 1. 实验材料和仪器
• 2. 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 4. 小结
• 第二章 异黄酮苷元改善阿尔茨海默病模型小鼠抗氧化能力的研究
• 1. 实验材料和仪器
• 2 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 4. 小结
• 第三章 异黄酮苷元减轻Aβ神经毒性和保护神经细胞的研究
• 1. 实验材料和仪器
• 2. 实验方法
• 3. 结果与讨论
• 4. 小结
• 总结
• 展望
• 缩写词中英文对照
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的论文
• 致谢