论文摘要
目的:以实时荧光定量PCR检测WT1mRNA的方法,探讨WT1mRNA在白血病的治疗转归、判断预后、监测微小残留病灶(minimal residual disease MRD)方面的作用。研究白血病患者WT1启动子区域DNA甲基化与WT1表达水平之间的关系及临床意义。方法:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增培养K562细胞的WT1基因和β2—MG,将扩增产物10倍梯度稀释制作标准曲线。以荧光定量PCR方法,定量检测64例白血病患者、56例对照者骨髓内WT1mRNA水平。利用甲基化特异性PCR(MSP)检测同样病人骨髓DNA甲基化水平,并比较WT1mRNA水平与其启动子DNA甲基化水平的关系。结果:1.组1急性白血病(复发,初治,未缓解)及慢粒加速期和急变期病人,共40例;骨髓WT1表达较高,范围为22.54—168.90拷贝/100ngRNA。2.组2缓解病人、慢粒慢性期,共24例;骨髓WT1范围为0—4.90拷贝/100ngRNA。3.组3非白血病患者和正常人骨髓,共56例;WT1表达较低,范围为0—3.20拷贝/100ngRNA。组1与组2,组3,患者WT1表达者相差数十倍。组2与组3之间无明显差别。2.骨髓中的WT1表达率与WT1启动子的DNA甲基化程度呈负相关性,在急性白血病人(初诊,复发,未缓解)和慢粒进入加速期和急变期的病人骨髓中其WT1启动子DNA甲基化率低于正常人和非白血病人(包括多发性骨髓瘤,淋巴瘤,血小板减少等)。结论:不同状态的白血病患者WT1表达有明显差异。WT1在急性白血病患者中有较高表达,可作为疾病转归、疗效考核和监测微小残留病灶(minimal residual diseaseMRD)的指标。WT1启动子区域DNA甲基化抑制WT1mRNA表达。激发WT1启动子区甲基化从而抑制WT1的表达,与急性白血病的发生转化有关,可以成为治疗和预防白血病发生的一个方向和方法。