低频脉冲电磁场对CRP作用下骨髓来源内皮祖细胞增殖、凋亡及一氧化氮分泌功能变化的影响

论文摘要

研究背景与目的新生血管形成是慢性缺血的重要代偿方式,心肌缺血可以刺激血管再生及侧枝循环的建立,恢复心肌的血液灌注。已有研究表明,在成人新生血管形成过程中,骨髓来源的内皮祖细胞的动员和分化起着非常重要的作用。而EPC的数量及功能与冠状动脉疾病的危险因素呈副相关。作为危险因素之一的CRP,在冠心病时其血清浓度明显升高,实验证明,EPC与一定浓度的CRP共同孵育,可使EPC数量呈剂量依赖性减少。CRP可抑制EPC的分泌功能,明显降低EPC内皮一氧化氮合酶mRNA及表面标志物的表达,减少NO的释放,从而抑制EPC的数量和功能,损害EPC介导的血管形成。随着高新技术的不断发展,人们越来越多的暴露在低频电磁场中,其生物学效应也越来越受到人们关注。大量的研究表明,低频脉冲电磁场可促进人脐静脉内皮细胞及牛主动脉内皮细胞的增殖,促进血管新生;刺激内皮细胞FGF、TGF-β等动脉形成主要促进因子的分泌。本实验拟探讨在体外培养的条件下,不同强度及作用时间的低频脉冲电磁场对与有效浓度的CRP共培养的EPC增殖、凋亡及NO分泌变化的影响,明确有效磁场强度,为缺血性心脏病的治疗探索新途径。方法第一部分EPC的分离培养及表型鉴定1、取大鼠股骨骨髓,以密度梯度离心法分离出单核细胞,在添加了VEGF和bFGF的M199培养基中培养,并定期观察;2、DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I免疫荧光双染,鉴定细胞表型;第二部分CRP对EPC的影响:1、取培养4天的细胞,给与不同浓度的CRP干预3天,弃干预因素后继续培养4天;2、MTT检测其增殖能力;3、硝酸还原酶法检测细胞的NO分泌能力。低频脉冲电磁场对12μg/ml CRP作用下EPC的影响:1、取培养4天的细胞,给与CRP及不同强度的低频脉冲电磁场干预3天,弃干预因素后继续培养4天;2、MTT检测其增殖能力;3、硝酸还原酶法检测细胞的NO分泌能力;4、流式细胞仪检测凋亡率。统计学分析:数值均以x±s表示。数据应用SPSS13.0进行数据统计,所用统计方法为单因素方差分析,多重均数差异显著性检验采用LSD-t检验。结果1、细胞鉴定结果显示DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I双染阳性,证实培养的细胞为内皮祖细胞。2、与对照组相比,低浓度（4,8μg/ml）CRP干预72 h对EPC的增殖、NO分泌能力的影响不显著（P>0.05）。浓度≥12μg/ml CRP干预72 h可明显抑制EPC的增殖与NO分泌（P<0.05）,且随着浓度的增加,抑制作用亦明显增强,存在浓度依赖性（P<0.05）。3、与单纯CRP组（12μg/ml）相比,0.6mT 8h,1.0mT 2h磁场强度明显促进与CRP共培养的EPC的增殖和NO分泌,抑制其凋亡率（P<0.05）;1.4mT 8h磁场组与单纯CRP组相比,抑制EPC的增殖,促进其凋亡,差异有统计学差异（P<0.05）,对EPC的NO分泌能力没有明显的影响（P>0.05）。结论1、密度梯度离心及贴壁培养筛选法可以分离得到EPC。2、CRP能抑制体外培养EPC的增殖及NO分泌能力,作用呈浓度依赖性。3、低频脉冲电磁场可逆转CRP引起的EPC增殖抑制、促凋亡作用及细胞分泌功能的损害。4、高强度磁场长时间作用后,可加重CRP对EPC的增殖抑制、促凋亡作用,提示低频脉冲电磁场对EPC有双向作用,其生物学特性与强度及作用时间相关。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 实验一 大鼠骨髓内皮祖细胞的分离与鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验一 图片
• 实验二 CRP 及低频脉冲电磁场对EPC 的影响
• 1 主要仪器及试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢