缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠IL-1β和TNF-α表达的影响

论文摘要

第一部分缺血后处理发挥脑保护作用的最佳方案目的：建立大鼠局灶性脑缺血后处理（ischemic postconditioning, IP）模型,探讨IP对局灶性脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）损伤发挥脑保护作用的最佳方案。方法：成年健康雄性Sprague-Dawley （SD）大鼠60只,随机分为6组：假手术组（sham）组、缺血再灌注（工/R）组、IP-15s、IP-30s、IP-45s及IP-60s亚组,每组大鼠各10只。局灶性脑缺血再灌注模型采用线栓法阻塞大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion, MCAO）2h,拔出线栓恢复再灌注24h,IP各组方法为在MCAO2h后持续再灌注前,分别给予3个循环的15s/15s、30s/30s、45s/45s、60s/60s再灌注/缺血。各组大鼠于再灌注24h行神经功能评分,并测定细胞凋亡及脑梗死体积,确定IP发挥脑保护作用的最佳方案。结果：成功建立线栓法MCAO缺血2h再灌注24h模型。I/R组大鼠可见神经功能缺失、缺血侧大脑半球梗死及凋亡细胞大量表达。与I/R组相比,IP-15s、IP-30s、IP-45s组大鼠神经功能评分均改善（P<0.05）,其中IP-15s组神经功能评分低于IP-30s和IP-45s组（P<0.05）; IP-15s、IP-30s、IP-45s组较工/R组脑梗死体积及凋亡细胞计数显著显著降低,特别以IP-15s组明显（P<0.05）。 IP-60s组与I/R组相比无显著性差异（P>0.05）。结论：改良线栓法制备脑缺血耐受模型切实可行；IP可减轻脑缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用；作用效果有时间窗限制,最佳方式为再灌注15s/缺血15s,反复3次。第二部分缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠IL-1β和TNF-α表达的影响目的：探讨IP对局灶性脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-1β （interleukin-1β, IL-1p）和肿瘤坏死因子-α （tumor necrosis factor-α, TNF-α）表达的影响,从而阐明IP的脑保护作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠110只随机分为假手术（sham）组（n=10）、缺血再灌注（I/R）组（n=50）和IP组（n=50）,根据再灌注时间后两组又分为6h、12h、24h、48h、72h五个亚组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,IP方法为在大脑中动脉阻闭2h后实施再灌注15s／缺血15s,反复3次。对各组进行神经功能学评分,TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织IL-1β和TNF-α蛋白的表达,原位杂交法检测IL-1β和TNF-α mRNA的表达。结果：（1）组间比较：I/R组大鼠可见神经功能缺失及缺血侧大脑半球梗死；与I/R组相比,IP组大鼠神经行为学评分改善,脑梗死体积明显减少（P<0.05）。IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA在I/R组额顶叶大量表达,IP组各时间点IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA表达均明显低于I/R组（P<0.05）。（2）组内比较：I/R组IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA表达6h开始升高,24h达到高峰,后逐渐下降,24h亚组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA表达高于其它亚组（P<0.05）。IP组IL-1β和TNF-α mRNA动态变化趋势同上。结论：IP显著下调IL-1β和TNF-α表达,缩小I/R大鼠脑梗死体积,提示IP可明显抑制脑组织I/R后的炎性反应,从而发挥神经保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 缺血后处理发挥脑保护作用的最佳方案
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠IL-1β和TNF-α表达的影响
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 综述
• 综述参考文献
• 攻读硕士学位期间的研究成果
• 致谢