论文题目: 针对c-Met的重组腺病毒介导的siRNA技术在肝癌基因治疗中的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 细胞生物学
作者: 张盛周
导师: 李朝军
关键词: 肝细胞癌,干扰,基因治疗
文献来源: 南京师范大学
发表年度: 2005
论文摘要: 肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，已成为我国第2位恶性肿瘤致死原因，临床上迫切需要新的治疗方法。随着人们对肝癌发病机制的深入认识和基因治疗技术的逐步成熟，肝癌的基因治疗已成为极有发展前景的治疗方法。 c-Met是肝细胞生长因子(HGF)受体，属Ⅱ型跨膜酪氨酸蛋白激酶受体，在多种肿瘤中过表达，且具有组成性活性，与肿瘤的发生和恶化密切相关。我们及其他学者的研究表明，c-Met在30-50％的肝癌病例中过表达。我们用免疫印迹实验检测5种不同肝癌细胞系(BEL7402，SMMC7721，HepG2，MHCC97-L和HCCLM3)和1种永生化的正常肝细胞系(LO2)，发现c-Met在MHCC97-L和HCCLM3细胞中表达量极高，是其它细胞系的7-8倍，且具组成性酪氨酸磷酸化。因而我们设想某些肝癌的发生与c-Met过表达相关，下调c-Met表达可能会抑制这些肝癌细胞的生长和浸润。 RNA干扰(RNAi)是最近几年发展起来的一门新兴的抑制基因表达技术。腺病毒载体因具有感染细胞种类多、感染效率高、外源基因表达水平高且既适于体外又适于体内研究等特点而被广泛用于基因治疗和临床试验中，本论文采用了腺病毒介导的RNAi技术来验证我们的设想。结果如下： 1．我们用细菌内同源重组的方法构建了针对c-Met的siRNA表达重组腺病毒AdH1-siRNA／met，RT-PCR和免疫印迹实验表明，AdH1-siRNA／met可特异性地使肝癌细胞c-Met表达量下降90％以上。 2．MTT法表明，AdH1-siRNA／met能显著抑制MHCC97-L和HCCLM3细胞的活力，感染第3天抑制率大于30％，但其对BEL7402，SMMC7721，HepG2细胞的生长抑制作用较小，感染第3天抑制率仅为8.10％，对LO2细胞的活力则没有明显影响。
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中文摘要
ABSTRACT
第一章 前言
第一节 HGF／c-Met信号通路异常与肿瘤发生
第二节 RNA干扰及其在肿瘤治疗中的应用
第二章 c-Met与Fas在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达
第三章 c-Met siRNA表达重组腺病毒载体的构建
第一节 siRNA表达重组腺病毒载体的原理及构建流程
第二节 c-Met siRNA表达重组穿梭质粒的构建
第三节 c-Met siRNA表达重组腺病毒的重组与包装
第四节 重组腺病毒对c-Met表达的抑制作用
第四章 AdH1-siRNA／met对肝癌生长的影响
第一节 AdH1-siRNA／met体外对肝癌细胞生长的影响
第二节 AdH1-siRNA／met体内对肝癌生长的影响
第五章 AdH1-siRNA／met抑制HGF诱导的肝癌细胞离散与浸润
全文小结
附录一
附录二
附录三
致谢
发布时间: 2006-10-27
参考文献
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