产抑制革兰氏阴性菌细菌素菌株的筛选鉴定及植物乳杆菌素LPC818的纯化

论文摘要

植物乳杆菌产生的细菌素不仅种类多，其菌株可产生良好的保健功效，因此成为研究的热点之一。为获得产细菌素的优良菌株，本文从多种植物源材料中筛选出4株产细菌素的菌株，并对各菌株进行了分类鉴定。在此基础之上，对植物乳杆菌LPC818产生的具广谱抑菌作用的细菌素plantaricin LPC818，进行了较为深入的研究。具体研究结果如下：1.从多种植物源材料中筛选到4株产细菌素菌株，经生理生化特性和16SrRNA基因序列的同源性分析鉴定，其中3株菌为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），1株为亚利桑纳乳杆菌（Lactobacillus arizonensis）；2. plantaricin LPC818对酸有一定的依赖性，在pH35.5时，具有抑菌活性；plantaricin LPC818的热稳定性较好，经100℃处理30min抑菌活力仍保持在80%以上；plantaricin LPC818对蛋白酶E、蛋白酶K和脂肪酶敏感，对糜蛋白酶和木瓜蛋白酶部分敏感，表明plantaricin LPC818为脂蛋白类物质；3. plantaricin LPC818的抑菌谱较广，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有较强的抑菌作用。以鸡白痢沙门氏菌为指示菌，确定了plantaricin LPC818的作用方式为杀菌；4.经60%饱和度的硫酸铵沉淀、Sephadex G-25凝胶层析和反向HPLC三步纯化，plantaricin LPC818的纯化倍数为7.87，得率为0.8%；通过蛋白质电泳及ESI-MS跟踪检测，推断出plantaricin LPC818的分子量为745.10Da。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 文献综述
• 1 细菌素
• 1.1 细菌素的定义及分类
• 1.2 细菌素的纯化
• 2. 植物乳杆菌素
• 2.1 Class I 植物乳杆菌素
• 2.2 Class II 植物乳杆菌素
• 2.3 其他植物乳杆菌素
• 2.4 植物乳杆菌素的应用
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 样品来源
• 2.1.2 菌株
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要试剂与药品
• 2.1.5 主要仪器与设备
• 2.1.6 主要溶液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 产抑制革兰氏阴性菌细菌素菌株的筛选
• 2.2.2 菌种的鉴定
• 2.2.3 细菌素 plantaricin LPC818 的生物学特性
• 2.2.4 细菌素 plantaricin LPC818 的分离纯化
• 3 结果与分析
• 3.1 产细菌素菌株的分离、筛选与确定
• 3.1.1 乳酸菌的分离
• 3.1.2 产抑菌物质菌株的筛选
• 3.1.3 产细菌素菌株的筛选
• 3.1.4 产细菌素菌株的确定
• 3.2 菌株的鉴定
• 3.2.1 菌落特征
• 3.2.2 菌体特征
• 3.2.3 菌株的生理生化特征
• 3.2.4 16S rRNA 基因序列分析及系统进化树的构建
• 3.3 细菌素 plantaricin LPC818 生物学特性
• 3.3.1 细菌素的 pH 活性范围
• 3.3.2 细菌素的热稳定性
• 3.3.3 细菌素对酶的敏感性
• 3.3.4 细菌素抑菌谱的测定
• 3.3.5 细菌素的作用方式
• 3.4 细菌素 plantaricin LPC818 的分离纯化
• 3.4.1 Lowery 法测蛋白浓度标准曲线
• 3.4.2 Sephadex G-25 凝胶层析
• 3.4.3 RP-HPLC
• 3.4.4 plantaricin LPC818 纯化效果的分析
• 3.4.5 plantaricin LPC818 分子量的初步确定
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 攻读硕士期间的研究成果
• 附录