水蛭抗肺纤维化作用及其机制的研究

论文摘要

肺纤维化（PF）是一组以肺间质弥漫性渗出、浸润和纤维化为主要病变的疾病。现代医学研究表明，肿瘤坏死因子（TNF）-α、转化生长因子（TGF）-β均是肺纤维化过程中最重要的细胞因子，在肺纤维化的炎症期及纤维化期均起着重要的作用。细胞外质中的糖蛋白成分纤维粘连素（FN）、层粘连蛋白（LN），在促进细胞外基质（ECM）沉积过程中也发挥着重要的作用，而ECM的过度沉积是肺纤维化形成的标志。 水蛭是临床常用的活血药物，其主要成分有水蛭素、肝素、纤溶素等。现代药理研究证明水蛭素是迄今发现的最强的凝血酶特异性抑制剂，可通过抑制凝血酶来抑制纤维化的发生发展，有研究表明水蛭可以抗肝纤维化。本课题从中医的“络病”角度出发，以古人善用的搜剔络脉之邪的水蛭为研究对象，进行抗大鼠、小鼠肺纤维化作用机制的研究，从整体实验到局部组织病理学变化，从生物化学变化到基因、蛋白表达，从不同层面探讨水蛭的作用机制，并通过不同时间点动态观察了肺纤维化的全过程及水蛭的干预作用，整个实验研究分为五个部分： 1．水蛭与沙参人参黄芩地龙疏血通抗BLM小鼠肺纤维化作用比较 通过对博来霉素A5（BLMA5）小鼠一般状况、肺系数、肺组织羟脯氨酸（HYP）的测定及病理形态学研究，观察水蛭对肺纤维化模型小鼠的影响。同时比较了水蛭与滋阴药沙参、清热药黄芩、补气药人参、清热通络药地龙及中成药疏血通抗小鼠肺纤维化的作用，验证水蛭这一善搜剔络脉瘀浊之品对PF作用优势。 结果显示：模型小鼠体重下降、活动减少、肺系数增加，组织病理多表现为中、重度肺泡炎及肺间质胶原沉积等。水蛭治疗后，体重逐渐增加、肺指数降低，肺组织HYP含量明显下降，组织病理显示肺泡炎及纤维化程度明显改善。与其它药物比较，在各项指标的改善上，沙参与水蛭作用相近；人参、疏血通在体重、肺系数改善上不显著，黄芩在肺组织HYP改善上不显著。提示：水蛭对小鼠肺纤维化多项指标有改善作用，且在不同程度上优于其它对照药物。

论文目录

• 英文缩略词表
• ABSTRACT
• 摘要
• 前言
• 肺纤维化为络病的探析
• 第一章 水蛭与沙参人参黄芩地龙疏血通抗BLM小鼠肺纤维化作用比较
• 1.前言
• 2.实验材料
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 动物
• 3.实验方法
• 3.1 小鼠肺间质纤维化模型复制方法
• 3.2 实验动物分组及给药方法
• 3.3 组织固定方法
• 3.4 肺组织留取方法
• 3.5 组织病理标本制备方法
• 3.6 肺组织HYP测定方法
• 3.7 统计方法
• 4.观察指标
• 4.1 小鼠一般状态
• 4.2 小鼠体重测量
• 4.3 小鼠肺系数
• 4.4 小鼠肺组织形态学观察
• 4.5 小鼠肺组织（HYP）含量测定
• 5 结果
• 5.1 小鼠一般状态比较
• 5.2 小鼠体重变化比较
• 5.3 小鼠肺系数变化比较
• 5.4 小鼠肺病理形态学变化
• 5.5 小鼠肺组织匀浆HYP测定
• 6 讨论
• 7.小结
• 第二章 水蛭对BLM大鼠病理形态学影响
• 1.前言
• 2.实验材料
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 药品与试剂配制
• 2.3 主要仪器设备
• 2.4 动物
• 3.实验方法
• 3.1 大鼠肺间质纤维化模型复制方法
• 3.2 实验动物分组及给药方法
• 3.3 肺组织固定方法
• 3.4 组织病理蜡块及切片的制备方法
• 3.5 HE染色方法
• 3.6 Masson染色方法
• 3.7 病理形态学定量分析
• 3.8 肺泡炎等级判定方法
• 3.9 肺纤维化等级判定方法
• 3.10 统计方法
• 4.观察指标
• 4.1 大鼠一般状态
• 4.2 大鼠体重测定
• 4.3 大鼠肺重测定
• 4.4 大鼠肺系数测定
• 4.5 大鼠肺组织形态学观察
• 5.实验结果
• 5.1 对大鼠一般状态的影响
• 5.2 对大鼠体重的影响
• 5.3 对大鼠肺重的影响
• 5.4 对大鼠肺系数的影响
• 5.5 对大鼠肺组织病理形态学的影响
• 6 讨论
• 7.小结
• 第三章 水蛭对博来霉素大鼠肺组织HYP及血清FN、LN的影响
• 1.前言
• 2.实验材料
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 动物
• 3.实验方法
• 3.1 大鼠模型复制、分组及给药方法
• 3.2 大鼠心脏采血方法
• 3.3 留取肺组织方法
• 3.4 大鼠肺组织HYP含量测定方法
• 3.5 血清FN测定方法
• 3.6 血清LN测定方法
• 3.7 统计方法
• 4.实验结果
• 4.1 对大鼠肺组织HYP的影响
• 4.2 对大鼠血清FN的影响
• 4.3 大鼠血清LN的影响
• 5 讨论
• 6.小结
• 1及TNF-α蛋白表达的影响'>第四章 水蛭对BLM大鼠肺组织TGF-β₁及TNF-α蛋白表达的影响
• 1.前言
• 2.实验材料
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 药品与试剂配制
• 2.3 免疫组化载玻片的处理
• 2.4 主要仪器设备
• 2.5 动物
• 3.实验方法
• 3.1 肺间质纤维化模型复制、分组及给药方法
• 3.2 组织固定方法
• 3.3 组织石蜡块的制备方法
• 3.4 石蜡切片制作方法
• 3.5 石蜡切片脱蜡脱水方法
• 3.6 免疫组织化学染色方法
• 3.7 表达结果判定及平均吸光度测量方法
• 3.8 统计方法
• 4.实验结果
• 1表达情况'>4.1 各组TGF-β₁表达情况
• 1表达的半定量分析'>4.2 各组TGF-β₁表达的半定量分析
• 4.3 各组TNF-α的表达情况
• 4.4 各组TNF-α表达的半定量分析
• 5.讨论
• 6.小结
• 1mRNA基因表达的影响'>第五章 水蛭对BLM大鼠及小鼠肺组织TGF-β₁mRNA基因表达的影响
• 1.前言
• 2.实验材料
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 药品与试剂配制
• 2.3 原位杂交载玻片的处理方法
• 2.4 主要仪器设备
• 2.5 动物
• 3.实验方法
• 3.1 肺间质纤维化模型复制方法
• 3.2 实验动物分组及给药方法
• 3.3 组织固定方法
• 3.4 组织石蜡块的制备方法
• 3.5 原位杂交切片制作方法
• 3.6 原位杂交实验程序
• 3.7 表达结果判定及平均吸光度测量方法
• 3.8 统计方法
• 4.实验结果
• 1mRNA基因表达情况'>4.1 大鼠肺组织TGF-β₁mRNA基因表达情况
• 1mRNA基因表达的半定量分析'>4.2 大鼠肺组织TGF-β₁mRNA基因表达的半定量分析
• 1mRNA基因表达情况'>4.3 小鼠肺组织TGF-β₁mRNA基因表达情况
• 1mRNA基因表达的半定量分析'>4.4 小鼠肺组织TGF-β₁mRNA基因表达的半定量分析
• 5 讨论
• 6.小结
• 第六章 肺间质纤维化发病机制及治疗的研究概况
• 第七章 水蛭的研究概况
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历
• 博士在读期间发表的论文