鸡胚原始生殖细胞体外培养及其诱导分化的研究

论文摘要

本研究采用Ficoll密度梯度离心法提取发育至第19期和第28期鸡胚胎性腺中的原始生殖细胞（Primordial Germ Cells,PGCs）,经过体外培养、传代后,利用同一种诱导分化剂在不同培养时间以及不同诱导分化剂在同一培养时间等方法定向诱导PGCs向神经元样细胞分化,并通过体外悬浮培养等方式探讨PGCs定向诱导分化的条件及保持发育多潜能性的能力,结果表明: 1.PGCs分离提纯后,在以DMEM为基础液,添加10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2 mmol/L L-谷氨酰胺、1 mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mol/L β-巯基乙醇、5ng/mL hSCF、10IU/mL mLIF、10ng/mL bFGF、0.04ng/mL hIL-11、10ng/mL IGF、100U/mL硫酸庆大霉素、以鸡胚成纤维细胞作饲养层的培养体系中培养,PGCs可贴壁,并聚集增殖,形成典型的鸟巢状克隆,传至第2代,AKP染色为阳性。表明在这种培养体系中,培养至第2代的PGCs仍保持其未分化的特性。 2.将第2代PGCs分别培养24h、48h、72h后,采用诱导剂维甲酸对其进行定向诱导,检测不同的培养时间对PGCs诱导分化为神经元样细胞的比率,结果显示,它们之间差异不显著（P>0.05）。但是,随着诱导剂中β-ME的浓度的增加,其对细胞的毒性作用也随之增加。

论文目录

• 文献综述
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 数据处理
• 实验结果
• 1 PGCs的培养结果
• 2 PGCs分化为神经元样细胞
• 3 PGCs悬浮培养结果
• 讨论
• 1 体外培养对PGCs特性的影响
• 2 饲养层对PGCs生长的影响
• 3 PGCs诱导分化为神经元样细胞
• 4 PGCs悬浮培养
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文