皮肤癣菌体外药物敏感试验及RAPD分型研究

论文摘要

目的：皮肤癣菌病是皮肤科的常见病、多发病，其病原真菌—皮肤癣菌的分类鉴定以及疗效不佳、复发率高一直是流行病学研究和防治工作中的难题。本课题对皮肤癣菌从临床标本的真菌学分析、抗真菌药物敏感性方法以及分子生物学分类鉴定等方面进行研究，以期为皮肤癣菌的分离、培养、鉴定提供指导，为皮肤癣菌病的诊断、治疗提供依据并为新药评价提供可靠的手段。方法：1、临床标本的真菌学分析：本试验包括18-70岁，病甲面积＞25％脚趾甲癣病例120例，分别来源于青岛医学院附属医院等青岛各医院皮肤科，应用KOH法镜检结合Mycosel和PDA鉴别选择性培养基对病甲标本进行分离，然后应用普通平板分离培养法和小培养法对分离出的皮肤癣菌进行形态学鉴定。2、皮肤癣菌抗真菌药物敏感性研究：按美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）2003年版产孢丰富丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案（M38-A）测定药物对所分离的三种皮肤癣菌的最低抑菌浓度（MIC）。3、皮肤癣菌的分子生物学分类鉴定：运用随机扩增多态性DNA分析的方法，以单个引物（GACA）4对我室分离培养得到的四种常见皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌）的基因组DNA进行扩增。检测聚合酶链反应产物，并根据电泳后指纹图谱的差异进行种属间鉴别。结果：1、临床标本的真菌学分析：从120例甲癣患者的病甲上获得的标本共培养和检测到4种皮肤癣菌，分别是红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌，这4种皮肤癣菌所占的比例分别为68.3％、22.5％、7.5％、1.7％。2、皮肤癣菌抗真菌药物敏感性研究：药敏试验检测出三种甲真菌的MIC值，结果显示特比萘酚对三种皮肤癣菌都具有非常好的抑制作用；M38-A方案有较好的重复性和稳定性，可作为一种较好的检验方法在实验室中应用。3、皮肤癣菌的分子生物学分类鉴定：运用随机扩增多态性DNA分析的方法可对四种常见的皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌）的基因型进行快速鉴别。结论：1、临床标本的真菌学分析：应用KOH法镜检结合Mycosel和PDA鉴别选择性培养基对标本进行分离，然后应用普通平板分离培养法和小培养法可以完成对皮肤癣菌的分离培养、种属鉴定。2、皮肤癣菌抗真菌药物敏感性研究：应用NCCLS的M38-A方案检测特比萘芬对常见四种皮肤癣菌的抗真菌活性，结果理想，拓宽了该方案的应用范围，有望建立皮肤癣菌抗真菌药敏试验标准化方案，更好地为临床治疗提供依据并为新药评价提供可靠的手段。3、皮肤癣菌的分子生物学分类鉴定：运用随机扩增多态性DNA分析的方法，以（GACA）4为单个引物可以快速鉴定和区分常见皮肤癣菌，这种PCR分型技术为皮肤癣菌病病原菌的鉴别及流行病学研究提供了一种简捷、特异的方法，对皮肤癣菌病的防治研究具有实际意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1 菌种来源
• 2 培养基
• 3 主要试剂
• 4 试剂配制
• 5 药品
• 6 仪器设备
• 第二章 实验方法
• 1 病甲样品的采集
• 2 实验设计和病甲标本采集后处理
• 3 真菌培养方法
• 4. 病甲标本镜检、培养特性及常见皮肤癣菌菌种鉴定
• 5 应用NCCLS M38-A方案检测含特比萘酚的甲涂剂对皮肤癣菌最低抑菌浓度
• 6 氯化苄法制备皮肤癣菌皮肤癣菌基因组DNA
• 7 PCR反应体系的建立
• 第三章 实验结果
• 1 120例病例的标本镜检和培养结果
• 2 分离于120例临床患者符合条件的73株皮肤癣菌药敏结果
• 3 皮肤癣菌的基因分型结果
• 第四章 附图
• 第五章 讨论
• 第六章 结论
• 第七章 参考文献
• 第八章 综述
• 致谢
• 附录