灰毡毛忍冬（金银花）愈伤组织及多倍体的诱导

论文摘要

金银花为忍冬科忍冬属植物,忍冬（Lonicera Japanica Thunb）及同属多种植物的干燥花蕾,它具有清热解毒、消炎退肿、保肝抗病毒、延缓衰老的功效,最近研究还表明它有良好的抗癌、抗爱滋病和预防"SARS"病毒的作用。我国是金银花商品化人工栽培面积最大的国家。近些年来,我国金银花产业发展较快,但金银花原料依然短缺。中药材一般利用其营养器官根、茎、叶为主要药用部位,而植物多倍体一般具有巨型性,因此多倍体对以营养器官入药的药用植物具有特殊的应用价值和较高的增产潜力。本试验以灰毡毛忍冬（L.macranthoides Hand. Mazz）新品种‘金翠蕾’（L.macranthoides "golden-green"）为材料,通过正交试验,进行了愈伤组织及再生植株的诱导；并用秋水仙素处理愈伤组织及其诱导出来的不定芽,进行了灰毡毛忍冬多倍体的诱导技术研究,筛选并鉴定了灰毡毛忍冬四倍体变异株系,为灰毡毛忍冬愈伤组织的诱导和药用植物多倍体的诱导提供了理论和实践依据。试验结果如下：（1）正交试验结果表明,在愈伤组织的诱导过程中,生长调节剂BANAA、2,4-D并不是浓度越高越好,适量的浓度反而有利于愈伤组织的形成。并且,得到诱导愈伤组织的最佳培养基：B5+2,4-D 0.5mg·L-1+BA 1.0 mg·L-1+NAA 3.0 mg·L-1;正交试验结果表明,由愈伤组织诱导不定芽时需要加入适量的KT,且KT的作用比BA、NAA都重要。并得到最佳愈伤组织诱导不定芽的培养基：B5+BA 3.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+KT 0.2 mg·L-1（2）利用秋水仙素作诱变剂,通过浸泡法和培养基中添加秋水仙素两种方法诱导多倍体,结果发现秋水仙素浸泡法或培养基中添加秋水仙素法均可以诱导出多倍体。但浸泡不定芽的方法较好,适宜的处理为0.4%浓度秋水仙素溶液浸泡不定芽16h,其诱导率最高,达到50.0%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 金银花的品种与分布
• 1.2 金银花育种的研究进展
• 1.3 金银花组织培养的研究进展
• 1.3.1 茎尖、茎段、芽的培养
• 1.3.2 叶片离体培养及愈伤组织诱导
• 1.3.3 细胞培养
• 1.4 药用植物多倍体诱导的研究进展
• 1.4.1 多倍体植物的特点
• 1.4.2 药用植物多倍体的人工诱导方法
• 1.4.3 秋水仙素诱导植物多倍体的研究进展
• 1.4.4 药用植物多倍体诱导存在的问题及建议
• 1.5 金银花多倍体诱导的研究进展
• 2 目的与意义
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料
• 3.2 愈伤组织及不定芽的诱导
• 3.2.1 无菌材料的获取
• 3.2.2 培养基及培养条件
• 3.2.3 愈伤组织的诱导
• 3.2.4 不定芽的诱导
• 3.2.5 适宜的继代培养基和生根培养基
• 3.2.6 试验数据的处理
• 3.2.7 组培苗的移栽
• 3.3 四倍体的离体诱导
• 3.3.1 秋水仙素浸泡法诱导多倍体
• 3.3.2 培养基中添加秋水仙素法诱导多倍体
• 3.3.3 染色体镜检
• 3.3.4 植株倍性鉴定方法
• 4 结果与分析
• 4.1 不同培养基和生长调节剂配比对愈伤组织诱导的影响
• 4.2 不定芽的诱导
• 4.3 观察根尖染色体方法的优化
• 4.3.1 取材时间对制片的影响
• 4.3.2 预处理液种类和浓度对制片的影响
• 4.3.3 解离时间对制片的影响
• 4.4 秋水仙素浸泡法对诱导多倍体的影响
• 4.5 培养基中添加秋水仙素法对诱导多倍体的影响
• 4.6 四倍体和二倍体试管苗根尖染色体鉴定和植株形态比较
• 4.6.1 四倍体和二倍体试管苗形态上的比较
• 4.6.2 四倍体和二倍体试管苗根尖染色体比较
• 4.6.3 四倍体和二倍体试管苗叶片下表皮气孔比较
• 5 结论与讨论
• 5.1 叶片诱导愈伤组织的结果
• 5.2 不定芽的诱导结果
• 5.3 多倍体诱导结果
• 5.4 诱导培养中出现的问题
• 5.5 多倍体的形态特征
• 5.6 移栽及田间栽培问题
• 参考文献
• 符号说明
• 攻读学位期间的主要学术成果
• 致谢