论文摘要
目的探讨丹参注射液(Salvia Injection)预处理是否通过激活PI3K/Akt信号传导通路参与肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemic reperfusion injury,HIRI)的保护作用,研究丹参在肝缺血再灌注损伤中的作用机制,作为实验依据,为临床中防治肝缺血再灌注损伤的应用加以支持。方法雄性健康SD大鼠80只,随机分为4组,即假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、丹参组(SI组)、丹参+PI3K/Akt通路特异性阻断剂组(LY组),每组分别按再灌注时间(1、3、6、24h)分为4个时相,每组各个时相均为5只。制作70%大鼠肝缺血再灌注模型,再分别按每个时相取材,测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)的水平;免疫印迹法(Western-Blot)测肝组织中PI3K、Akt及p-Akt(Ser308)蛋白的表达情况;TUNEL法观测各组的肝细胞凋亡情况;应用光镜观察大鼠肝脏组织形态学变化。结果肝脏酶学(ALT、AST、LDH)检测:IR、SI、LY组的ALT、AST、LDH水平明显高于Sham组(P<0.05);IR组各个时相的ALT、AST、LDH水平均高于SI组和LY组(P<0.05);与LY组比较,SI组各个时相的ALT、AST、LDH水平均下降(P<0.05)。肝组织形态学变化:可见IR组损伤最为明显,SI组和LY组较IR组轻,其中SI组更轻,而Sham组肝组织形态接近正常。Western-Blot检测:各组PI3K、AKT的表达无显著差异(P>0.05);而在p-Akt的表达中,Sham、IR、LY组组间无显著差异(P>0.05),SI组各时相的表达都高于其余各组,且均有显著差异(P<0.05)。凋亡检测:IR组肝细胞有典型的凋亡特征,SI、LY及Sham组凋亡指数均低于IR组(P<0.05);其中SI组又低于LY组(P<0.05);Sham组凋亡极少见,优于其余各组。结论肝脏缺血再灌注造成了肝细胞显著损伤,丹参注射液预处理通过激活PI3K/Akt信号传导通路,抑制肝脏细胞的凋亡,从而发挥了保护肝脏的作用。
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