本文主要研究内容
作者陆维智（2019）在《VX-11e抑制Zika病毒复制的机制研究》一文中研究指出：研究背景和目的寨卡病毒(ZIKV)是目前几种新兴的虫媒传播病毒之一,1947年首次在乌干达寨卡森林发现,同时也是巴西和波多黎各脑炎和胎儿小头畸形暴发的原因。寨卡病毒可通过伊蚊传播,但与其他蚊媒传播的黄病毒(FVs)不同的是,寨卡病毒具有其独特的特性,即可通过性传播甚至导致持续性传播(1至6个月)。2015年在美洲暴发流行的寨卡病毒已经引发全球公共卫生紧急状况,据预测,在美洲,每年可出现由寨卡病毒引起的400万例临床病例。胎盘和血脑屏障内皮细胞(ECs)通常能阻止母体和胎儿血液的混合,并限制一些物质进入成人和胎儿的神经细胞室。而寨卡病毒则是可以穿过这些细胞,进而感染胎儿和母体。所感染的细胞包括神经干细胞、星形胶质细胞、神经祖细胞、小胶质细胞和Hofbauer细胞。据报道,系统进化树分析发现,同样能在人和蚊子中共同传播的登革病毒(DENVs)与寨卡病毒具有惊人的同源性。目前仍不清楚引发最近暴发流行和严重疾病的原因,迫切需要实验系统来解决这些关键的科学问题。新近研究发现寨卡病毒感染与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路存在一定的联系,而且MAPK-ERK信号通路目前仍然是目前的研究热点。因此本课题主要研究ERK2抑制剂VX-11e抑制寨卡病毒的复制、增殖的机制。从而为临床寨卡病毒病的药物治疗研究提供新的思路。研究方法1.VX-11e对寨卡病毒复制的影响寨卡病毒在Vero细胞中扩增和滴度测定后,感染HBMEC和Vero细胞。不同浓度的VX-11e作用于感染病毒的细胞后,应用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR,qPCR)等技术分别检测病毒在细胞内的复制情况,以及相对应的细胞外调节蛋白激酶(ERK)和核糖体S6蛋白激酶(RSK)的表达量,确定VX-1 1e对寨卡病毒复制的影响。2.RSK对寨卡病毒复制的影响运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对RSK和ERK进行沉默后,检测RSK和ERK的表达量,确证沉默相应基因后RSK和ERK表达量减少。应用qPCR技术对寨卡病毒的复制增殖量进行检测,明确病毒复制与RSK和ERK表达量之间的关系。3.寨卡病毒NS5蛋白表达载体的构建运用真核表达载体pEGFP-N1构建寨卡病毒NS5蛋白表达载体。结果(1)寨卡病毒可以在HBMEC中扩增,与新近的报道结果一致。尤其是ZIKV可以感染HBMEC,为ZIKV导致神经系统感染解释了跨越血脑屏障的途径。(2)VX-11e在一定浓度范围内对FHBMEC和Vero细胞无明显毒性,对寨卡病毒具有明显的抑制增殖的作用,具有浓度依赖性。这种抑制作用不影响病毒对细胞的粘附,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制作用。(3)VX-1 1e在mRNA和蛋白质水平上具有抑制RSK表达的作用。(4)初步实验结果提示抑制RSK的表达对病毒的复制具有抑制作用。(5)成功构建pEGFP-NS5蛋白表达载体。(6)VX-11e对寨卡病毒全长克隆Z0E2-GFP转染后产生的寨卡病毒有抑制作用,而突变后Z0E2-mute不表达NS5蛋白,VX-11e对其抑制效果消失,重新加入pEGFP-NS5表达载体表达NS5蛋白后,抑制效果恢复。结论VX-11e通过抑制细胞内RSK的表达,进而影响寨卡病毒NS5蛋白,最终达到抑制寨卡病毒在细胞中复制的作用。通过本文的研究,为临床寨卡病毒病的药物治疗研究提供新的思路线索。
Abstract
yan jiu bei jing he mu de zhai ka bing du (ZIKV)shi mu qian ji chong xin xing de chong mei chuan bo bing du zhi yi ,1947nian shou ci zai wu gan da zhai ka sen lin fa xian ,tong shi ye shi ba xi he bo duo li ge nao yan he tai er xiao tou ji xing bao fa de yuan yin 。zhai ka bing du ke tong guo yi wen chuan bo ,dan yu ji ta wen mei chuan bo de huang bing du (FVs)bu tong de shi ,zhai ka bing du ju you ji du te de te xing ,ji ke tong guo xing chuan bo shen zhi dao zhi chi xu xing chuan bo (1zhi 6ge yue )。2015nian zai mei zhou bao fa liu hang de zhai ka bing du yi jing yin fa quan qiu gong gong wei sheng jin ji zhuang kuang ,ju yu ce ,zai mei zhou ,mei nian ke chu xian you zhai ka bing du yin qi de 400mo li lin chuang bing li 。tai pan he xie nao bing zhang nei pi xi bao (ECs)tong chang neng zu zhi mu ti he tai er xie ye de hun ge ,bing xian zhi yi xie wu zhi jin ru cheng ren he tai er de shen jing xi bao shi 。er zhai ka bing du ze shi ke yi chuan guo zhe xie xi bao ,jin er gan ran tai er he mu ti 。suo gan ran de xi bao bao gua shen jing gan xi bao 、xing xing jiao zhi xi bao 、shen jing zu xi bao 、xiao jiao zhi xi bao he Hofbauerxi bao 。ju bao dao ,ji tong jin hua shu fen xi fa xian ,tong yang neng zai ren he wen zi zhong gong tong chuan bo de deng ge bing du (DENVs)yu zhai ka bing du ju you jing ren de tong yuan xing 。mu qian reng bu qing chu yin fa zui jin bao fa liu hang he yan chong ji bing de yuan yin ,pai qie xu yao shi yan ji tong lai jie jue zhe xie guan jian de ke xue wen ti 。xin jin yan jiu fa xian zhai ka bing du gan ran yu si lie yuan huo hua dan bai ji mei (MAPK)xin hao tong lu cun zai yi ding de lian ji ,er ju MAPK-ERKxin hao tong lu mu qian reng ran shi mu qian de yan jiu re dian 。yin ci ben ke ti zhu yao yan jiu ERK2yi zhi ji VX-11eyi zhi zhai ka bing du de fu zhi 、zeng shi de ji zhi 。cong er wei lin chuang zhai ka bing du bing de yao wu zhi liao yan jiu di gong xin de sai lu 。yan jiu fang fa 1.VX-11edui zhai ka bing du fu zhi de ying xiang zhai ka bing du zai Veroxi bao zhong kuo zeng he di du ce ding hou ,gan ran HBMEChe Veroxi bao 。bu tong nong du de VX-11ezuo yong yu gan ran bing du de xi bao hou ,ying yong shi shi ying guang ding liang PCR(Real-Time PCR,qPCR)deng ji shu fen bie jian ce bing du zai xi bao nei de fu zhi qing kuang ,yi ji xiang dui ying de xi bao wai diao jie dan bai ji mei (ERK)he he tang ti S6dan bai ji mei (RSK)de biao da liang ,que ding VX-1 1edui zhai ka bing du fu zhi de ying xiang 。2.RSKdui zhai ka bing du fu zhi de ying xiang yun yong RNAgan rao (RNA interference,RNAi)ji shu dui RSKhe ERKjin hang chen mo hou ,jian ce RSKhe ERKde biao da liang ,que zheng chen mo xiang ying ji yin hou RSKhe ERKbiao da liang jian shao 。ying yong qPCRji shu dui zhai ka bing du de fu zhi zeng shi liang jin hang jian ce ,ming que bing du fu zhi yu RSKhe ERKbiao da liang zhi jian de guan ji 。3.zhai ka bing du NS5dan bai biao da zai ti de gou jian yun yong zhen he biao da zai ti pEGFP-N1gou jian zhai ka bing du NS5dan bai biao da zai ti 。jie guo (1)zhai ka bing du ke yi zai HBMECzhong kuo zeng ,yu xin jin de bao dao jie guo yi zhi 。you ji shi ZIKVke yi gan ran HBMEC,wei ZIKVdao zhi shen jing ji tong gan ran jie shi le kua yue xie nao bing zhang de tu jing 。(2)VX-11ezai yi ding nong du fan wei nei dui FHBMEChe Veroxi bao mo ming xian du xing ,dui zhai ka bing du ju you ming xian de yi zhi zeng shi de zuo yong ,ju you nong du yi lai xing 。zhe chong yi zhi zuo yong bu ying xiang bing du dui xi bao de nian fu ,zhu yao shi tong guo yi zhi bing du zai xi bao nei de fu zhi zuo yong 。(3)VX-1 1ezai mRNAhe dan bai zhi shui ping shang ju you yi zhi RSKbiao da de zuo yong 。(4)chu bu shi yan jie guo di shi yi zhi RSKde biao da dui bing du de fu zhi ju you yi zhi zuo yong 。(5)cheng gong gou jian pEGFP-NS5dan bai biao da zai ti 。(6)VX-11edui zhai ka bing du quan chang ke long Z0E2-GFPzhuai ran hou chan sheng de zhai ka bing du you yi zhi zuo yong ,er tu bian hou Z0E2-mutebu biao da NS5dan bai ,VX-11edui ji yi zhi xiao guo xiao shi ,chong xin jia ru pEGFP-NS5biao da zai ti biao da NS5dan bai hou ,yi zhi xiao guo hui fu 。jie lun VX-11etong guo yi zhi xi bao nei RSKde biao da ,jin er ying xiang zhai ka bing du NS5dan bai ,zui zhong da dao yi zhi zhai ka bing du zai xi bao zhong fu zhi de zuo yong 。tong guo ben wen de yan jiu ,wei lin chuang zhai ka bing du bing de yao wu zhi liao yan jiu di gong xin de sai lu xian suo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自南方医科大学的陆维智，发表于刊物南方医科大学2019-09-02论文，是一篇关于寨卡病毒论文,细胞外调节蛋白激酶论文,核糖体蛋白激酶论文,寨卡病毒非结构蛋白论文,南方医科大学2019-09-02论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自南方医科大学2019-09-02论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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