论文摘要
本试验以结球甘蓝不同熟性的6个品种为材料,对影响其原生质体培养的主要因素进行了探讨；初步建立了适合结球甘蓝原生质体游离、纯化、收集、培养以至再生出完整植株的实用技术体系；为其非对称细胞融合及品种改良与创新等研究奠定了基础。研究结果如下：1.原生质体的游离条件优化表明：以2% Cellulase R-10+0.5% Pectolase Y-23 +9CPW+5mmol/L MES酶液组合的酶解效果最佳。其对4d苗龄的结球甘蓝下胚轴原生质体进行游离纯化,16h后以100rpm,4min的离心条件对游离的原生质体进行纯化,得到原生质体产量为16.85×105个/g,所获得原生质体活力为86.3%。2.原生质体培养条件的优化表明：以YP+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L+ 6-BA0.2mg/L的原生质体培养效果最佳,10d后细胞分裂频率与40d后植板率分别为20.8%和0.53%。采用固液双层培养的方法,细胞分裂频率与液体浅层培养相差不大,但植板率明显大于液体浅层培养法获得的植板率。由MS培养基添加NAA 0.025mg/L+2,4-D0.025mg/L+6-BA0.1mg/L对结球甘蓝下胚轴原生质体微愈伤组织增殖效果好。MS培养基附加6-BA 2g/L,ZT 0.5mg/L对结球甘蓝下胚轴原生质体再生愈伤组织芽分化效果较佳。在结球甘蓝原生质体培养再生植株过程中,往芽分化培养基中添加AgNO37.5mg/L,能明显提高再生绿芽的分化,出芽率由51.3%提高至65.2%,褐化率下降约5个百分点。取生长状态好的再生绿芽,以1/2MS附加IBA 0.2mg/L为生根培养基进行生根培养,能全部生根获得完整再生植株,植株再生率为100%。3.再生植株差异性检测表明：所获得的QL再生植株,在外观形态上基本与母本植株相同,仅有数株表型略有不同。流式细胞仪细胞倍性检测结果显示,所检测的原生质体再生植株,其中有79.6%为正常二倍体,9.1%为单倍体植株,6.8%为单/二倍体嵌合体植株,4.5%为四倍体植株。用RAPD分子标记技术对所获得的再生植株进行DNA水平的变异性分析,结果表明,结球甘蓝原生质体再生植株与母本植株间平均遗传相似系数为0.8709。4.在本试验条件下,通过对几个品种的原生质体培养效果比较,初步判定,早熟性品种可能更适合用于进行原生质体培养。
论文目录
摘要ABSTRACT目录1 前言1.1 植物原生质体培养研究概况1.1.1 植物原生质体的概念和特征1.1.2 植物原生质体培养的研究进展1.2 结球甘蓝原生质体培养研究概况1.2.1 结球甘蓝原生质体培养研究进展1.2.2 结球甘蓝原生质体培养影响因素的研究1.2.3 结球甘蓝原生质体培养研究意义1.3 本课题的研究目的与意义2 实验材料与方法2.1 实验材料2.1.1 供试材料2.1.2 主要仪器设备2.2 原生质体的游离与纯化2.2.1 无菌苗的培养2.2.2 酶液的配制2.2.3 原生质体的游离2.2.4 原生质体的收集和纯化2.3 原生质体产量及活性检测2.4 原生质体培养2.4.1 培养基的配制2.4.2 培养方法2.4.3 原生质体分裂结果统计2.5 植株再生2.5.1 微愈伤组织的增殖培养2.5.2 愈伤组织分化出芽2.5.3 成苗生根获得完整植株2.6 再生植株变异性鉴定2.6.1 外观形态鉴定2.6.2 再生植株倍性检测2.6.3 再生植株遗传变异分析3 结果与分析3.1 无菌苗的获得3.2 不同因素对原生质体游离效果的影响3.2.1 酶浓度组合3.2.2 酶解时间3.2.3 取材苗龄3.2.4 纯化时的离心条件3.2.5 取材苗的不同光照处理3.3 原生质体的培养3.3.1 激素浓度组合3.3.2 培养基的选择3.3.3 培养方式对原生质体培养的影响3.4 微愈伤增殖3.5 芽分化培养3.5.1 激素浓度的选择3的添加对芽分化的影响'>3.5.2 AgNO3的添加对芽分化的影响3.6 植株再生3.7 再生植株鉴定3.7.1 外观形态鉴定3.7.2 倍性检测3.7.3 再生植株遗传变异分析4 讨论4.1 不同基因型在原生质体培养及植株再生中的差异4.2 原生质体培养影响因子的讨论4.2.1 供体材料的预处理4.2.2 培养中的渗透压4.2.3 原生质体培养中的褐化4.2.4 琼脂糖包埋培养的效果4.3 实验重演性的问题4.4 其它提高原生质体培养效果的方法4.5 变异性检测实验4.5.1 实验的重复性4.5.2 电泳条带的取舍4.6 结球甘蓝原生质体再生植株中遗传变异性的利用[参考文献][附录][图版]致谢攻读学位期间发表的学术论文目录
相关论文文献
标签：原生质体培养论文; 结球甘蓝论文; 植株再生论文; 流式细胞术论文; 遗传变异性论文;
