白藜芦醇改善高脂喂养小鼠胰岛素抵抗和脂肪肝的研究

论文摘要

目的:建立高脂喂养的肥胖胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）2型糖尿病C57BL/6J小鼠模型。方法:雄性C57BL/6J小鼠30只,随机选择15只小鼠为正常对照（normal control,NC）组,饲以基础饲料。其余15只小鼠喂以高脂饲料,给予单纯高脂饲料,为单纯高脂饮食（high fat diet,HF）组。第24w末时结束动物模型。第8w末和第24w末测定小鼠血糖、血游离脂肪酸（FFA）、血甘油三酯（TG）、血胆固醇（Chol）及血胰岛素,行腹腔葡萄糖注射耐量试验,并根据血糖和血胰岛素值计算ISI和HOMAIR指数（HOMA-IR）。通过以上指标最终确定肥胖的2型DM小鼠模型有无建立及其代谢特点。结果:高脂喂养第8w末时,HF组体重较NC组有明显增加（分别为25.5±0.9g和26.8±1.0g）,差异具有显著意义（P<0.01）,空腹血糖HF组较NC组明显增加（P<0.01）,IPGTT HF组小鼠0min,30min,60min和120min的血糖分别为NC组小鼠对应时点血糖的1.26倍、1.43倍、1.40倍和1.21倍,且差异均具有显著性（P<0.01）;第24w末时,HF组小鼠血糖进一步升高,IPGTT HF组小鼠0min,30min,60min和120min的血糖分别为NC组小鼠对应时点血糖的1.67倍、1.71倍、1.92倍和2.20倍,且差异均具有显著性（P均<0.01）;同时血FFA,TG和Chol也明显增加,和NC组相比差异具有显著性（P<0.01）。第8wHF组小鼠空腹胰岛素为NC组小鼠的1.8倍（P<0.01）,第24w末HF组小鼠空腹胰岛素为NC组小鼠的2.18倍（P<0.01）并且胰岛素敏感性指数ISI下降,IR指数HOMA-IR增高,与NC组相比,差异具有显著性（P<0.01、P<0.01）。结论:高脂饮食诱导的C57BL/6J小鼠具备肥胖、高血糖、脂代谢紊乱、IR和高胰岛素血症的特点。高脂饮食成功的诱导了肥胖、IR的2型糖尿病模型。目的:探讨白藜芦醇改善IR的作用及机制。方法:45只雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组（每组15只）:正常对照组（标准饲料喂养,NC组）,高脂饲料喂养组（高脂饲料喂养,HF组）,和白藜芦醇治疗组（HR组）,其中白藜芦醇组全程高脂饲料喂养,并从第9周开始用白藜芦醇干预治疗（400mg/kg.day）,各组均继续喂养16周,共喂养24周。24周末检测体重、血糖、胰岛素,处死动物,检测皮下脂肪和内脏脂肪含量。留取内脏脂肪组织石蜡切片HE染色观察形态学改变。检测内脏脂肪组织ATGL、PGC-1αmRNA和ATGL蛋白的表达,肝脏组织糖异生相关基因PEPCK、G-6-Pase和FoxOlmRNA的表达水平。结果:与NC组相比,HF组小鼠体重、脂肪含量尤其是内脏脂肪含量明显增高（P<0.01）,光镜下内脏脂肪细胞形态变大,ATGL mRNA和蛋白表达减少但无统计学意义,HR组小鼠体重、内脏脂肪含量明显降低（P<0.01）,光镜下内脏脂肪细胞形态变小,ATGL mRNA和蛋白表达增加（P<0.05）。与NC组相比,内脏脂肪组织HF组PGC-1αmRNA表达下降,为NC组的56.3%（P<0.01）;HR组PGC-1αmRNA达到NC组的90.8%,和HF组相比差异有显著性（P<0.01）。HF组肝脏FoxO1、PEPCK和G-6-P mRNA表达为NC组135.6%,154.8%和164.7%（P<0.05）,HR组肝脏FoxO1、PEPCK、G-6-P mRNA表达较HF组降低到NC组的108.4%,105.5%,110.3%（P<0.05）。结论:1.白藜芦醇通过减轻腹型肥胖减轻高脂喂养诱导的IR,内脏脂肪ATGL的表达上调是白藜芦醇减轻内脏肥胖的机制之一;2.白藜芦醇通过促进PGC-1α的表达增加内脏脂肪组织对脂肪的氧化利用;3.长期高脂饮食促进肝脏FoxO1,PEPCK,G-6-Pase基因表达,糖异生增加,导致空腹血糖增加;白藜芦醇能有效降低FoxO1,PEPCK,G-6-Pase基因表达,增强胰岛素信号传导,抑制肝脏糖异生,改善IR和糖代谢。目的:观察白藜芦醇对高脂饮食诱导的小鼠NAFLD的改善作用及其机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠45只,随机选择15只小鼠为正常对照（normal control,NC）组,饲以基础饲料。其余30只小鼠喂以高脂饲料,8w末将其随机分为2组:继续给予单纯高脂饲料,为单纯高脂饮食（high fat diet,HF）组;高脂饮食喂养同时给予白藜芦醇400mg/kg/day灌胃,为白藜芦醇干预（HR）组。第24w末时结束动物模型,处死动物,观察肝脏形态学变化。RT-PCR检测肝脏内ATGL和PGC-1αmRNA基因表达,WesternBlot免疫印迹检测肝脏内ATGL蛋白表达水平。结果:HF组出现显著的IR,HR组IR明显减轻。HF组肝脏出现明显脂肪变性,肝组织内ATGL蛋白水平降低到对照组的70.2%（P<0.01）。HR组镜下脂肪变性明显好转,与HF组相比,HR组肝组织内ATGL和PGC-1αmRNA及ATGL蛋白表达增加（P<0.05）。结论:1.白藜芦醇通过减轻IR间接改善NAFLD;2.白藜芦醇可以上调肝脏ATGL的表达和PGC-1αmRNA的表达促进脂解和脂肪的氧化利用而直接改善NAFLD。

论文目录

• 英文缩略词表及中文对照
• 第一部分 摘要
• 第一部分 Abstract
• 第二部分 摘要
• 第二部分 Abstract
• 第三部分 摘要
• 第三部分 Abstract
• 第一部分 高脂诱导的胰岛素抵抗的2型糖尿病小鼠模型的建立
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 白藜芦醇改善2型糖尿病小鼠肥胖和胰岛素抵抗及其机制
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 白藜芦醇改善脂肪肝及其机制研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 综述:ATGL及脂肪动员的研究进展
• 已发表（接收） 文章
• 致谢