用对虾血细胞单克隆抗体研究分析白斑症病毒的受体

论文题目: 用对虾血细胞单克隆抗体研究分析白斑症病毒的受体

论文类型: 博士论文

论文专业: 水生生物学

作者: 张志栋

导师: 战文斌

关键词: 单克隆抗体,对虾血细胞,白斑症病毒,受体,发生

文献来源: 中国海洋大学

发表年度: 2005

论文摘要: 通过白斑症病毒(WSSV)与对虾血细胞膜的体外结合方法和对虾血细胞原代培养的方法,从研制出的抗对虾血细胞的单克隆抗体中,筛选出抗WSSV受体的单克隆抗体,并用Western blot和亲和层析方法鉴定了WSSV受体的分子量。实验结果如下: 利用WSSV和对虾血细胞膜体外结合的DOT BLOT方法,从抗中国对虾血细胞的单克隆抗体中筛选出单克隆抗体4D8具有部分封闭WSSV和对虾血细胞膜结合的作用。对虾血细胞膜和有部分封闭作用的单克隆抗体4D8反应,再和地高辛标记的WSSV(WSSV-DIG)孵育,由于部分受体被封闭使WSSV-DIG无法与其结合,由DOT BLOT得到的结果颜色较浅;对虾血细胞膜和无封闭作用的单克隆抗体反应,再和WSSV-DIG孵育,由于WSSV-DIG与对虾血细胞膜上的所有受体结合,由DOT BLOT得到的结果颜色较深。利用WSSV和对虾血细胞膜体外结合的ELISA方法,对单克隆抗体4D8的封闭效果进行了定量分析。对虾血细胞膜和无封闭作用的单克隆抗体反应,再和WSSV-DIG孵育,由于WSSV-DIG与对虾血细胞膜上的所有受体结合,由ELISA得到的OD值较大,为0.423;对虾血细胞膜和有封闭作用的单克隆抗体4D8反应,再和WSSV-DIG孵育,由于部分受体被封闭使WSSV-DIG无法与其结合,由ELISA得到的OD值较小,为0.256,占受体不被封闭所得OD值的41%。用对虾血细胞原代培养的方法对单克隆抗体4D8的封闭效果进一步验证:与无封闭作用的单克隆抗体孵育的原代培养的血细胞,经WSSV感染后,第3天就表现出了病理变化;与有封闭作用的单克隆抗体4D8孵育的原代培养的血细胞,经WSSV感染后,出现病理变化较晚,第5天才表现出了病理变化。实验结果表明:单克隆抗体4D8能封闭部分WSSV受体,从而延缓了WSSV对原代培养血细胞的感染进程。经Western blot和亲和层析技术鉴定,抗WSSV受体的单克隆抗体4D8在中国对虾血细胞膜上识别的WSSV受体的分子量为175kDa。单克隆抗体4D8在日本对虾血细胞上识别的抗原决定簇分子量为175kDa,在凡纳滨对虾血细胞上识别

论文目录:

摘要

1 前言

1.1 单克隆抗体的研究进展

1.2 病毒受体的研究情况

1.3 用单克隆抗体对水生动物病毒受体的研究

1.4 对虾血细胞的研究进展

2 白斑症病毒与中国对虾血细胞膜的结合

2.1 白斑症病毒的提纯

2.2 用地高锌标记提纯的白斑症病毒

2.3 中国对虾血细胞膜的粗提

2.4 白斑症病毒与中国对虾血细胞膜的结合

2.5 讨论

3 抗白斑症病毒受体单克隆抗体的筛选

3.1 中国对虾血细胞单克隆抗体的研制

3.2 DOTBLOT筛选抗白斑症病毒受体的单抗

3.3 ELISA筛选抗白斑症病毒受体的单抗

3.4 原代细胞培养验证单抗4D8对白斑症病毒受体的封闭作用

3.5 讨论

4 白斑症病毒受体分子量的鉴定

4.1 Western blot鉴定白斑症病毒受体的分子量

4.2 亲和层析鉴定白斑症病毒受体的分子量

4.3 讨论

5 单抗4D8在其它甲壳动物血细胞上识别的抗原决定簇分子量

5.1 材料

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

6 对虾血细胞的免疫学研究

6.1 对虾血细胞的抗原性交叉反应

6.2 对虾血细胞单克隆抗体识别的血细胞类型

6.3 对虾血细胞的发生

6.4 对虾感染白斑症病毒后大颗粒血细胞的变化

参考文献

致谢

发布时间: 2005-10-26

参考文献

[1].玻璃海鞘（Ciona intestinalis）实验养殖、血细胞的分类及其免疫应答研究[D]. 刘利平.中国科学院研究生院（海洋研究所）2005
[2].中国对虾血细胞发生、功能及其白斑综合征病毒受体蛋白研究[D]. 林颖博.中国海洋大学2009

用对虾血细胞单克隆抗体研究分析白斑症病毒的受体

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