感觉神经肽P物质对糖尿病大鼠难愈创面的促愈作用及应用性研究

论文摘要

糖尿病是由于胰岛素绝对或相对不足及胰岛素抵抗造成的以高血糖为典型临床表现的全身代谢紊乱综合症。其发病率呈逐年升高趋势,目前影响着全球约1～2 % 的人口。糖尿病的严重性不在糖尿病本身,而在其并发症,如糖尿病视网膜病、糖尿病性肾病、糖尿病性神经病变、糖尿病难愈创面及溃疡等。调查表明,糖尿病患者其神经病变的发生率高达90%～100%,而此类患者往往伴随有皮肤溃疡及创面愈合不良。因足部溃疡导致的截肢及相关治疗费用在美国平均每年高达100 多亿,中国每年用于糖尿病的医疗费估计约400 亿人民币,其中80%的费用主要是用于糖尿病并发症的防治。目前对引起糖尿病皮肤溃疡及创面难愈的机制尚不清楚,但与外周感觉神经病变密切相关。近年来研究表明,感觉神经末梢分泌的神经肽P 物质是创伤修复过程中的重要因子,不仅能够促进多种修复细胞的增殖、迁移、分化,更重要的是调节多种神经营养因子如NGF、bFGF、EGF 等的细胞合成及分泌,从而促进组织修复。因此,深入研究感觉神经及其释放的神经肽在糖尿病难愈创面的作用及机制,合理有效的使用外源性的神经肽制剂可为糖尿病难愈创面的治疗提供新的方法和思路。方法:本实验首先采用链尿佐菌素（STZ）所致的糖尿病大鼠模型,利用免疫组化及酶联免疫技术观察了糖尿病大鼠在发病后不同时间其皮肤SP 阳性神经的分布特点及局部含量变化,H-E 染色观察皮肤组织在光镜和电镜下的病理改变。在此基础上,采用背部全层皮肤切割伤,观察外源性应用感觉神经肽SP 对糖尿病大鼠难愈伤口的促愈作用。进一步采用多囊脂质体包封技术,制备SP 多囊脂质体,通过观察组织宏观和微观的变化,验证SP 多囊脂质体对难愈伤口的促愈作用。通过对SP 蛋白质晶体结构的分析,初步合成一种来源于SP 的N 端6 肽,同时验证了其对糖尿病大鼠皮肤难愈伤口的促愈作用。旨在优化感觉神经肽P 物质在难愈伤口中的促愈效果,为其进一步的临床应用奠定理论和实验基础。实验中同时采用免疫组化荧光标记的方法研究了糖尿病大鼠皮肤及肉芽组织中NK1 和NK2 受体的表达特点,采用原位杂交的方法观察外源性神经肽P 物质对组织修复过程中主要修复细胞内源性P 物质表达的影响,初步探讨了外源性P 物质对难愈伤口的促愈机制。结果:经链尿佐菌素腹腔注射后一周,大鼠血糖升高并稳定在16.7 mmol/L 以上。

论文目录

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• 论文正文 感觉神经肽P 物质对糖尿病大鼠难愈创面的促愈作用及应用性研究
• 前言
• 第一部分 糖尿病大鼠模型建立及其皮肤和创面中SP 的表达特点
• 实验一 糖尿病大鼠皮肤病理改变及P 物质含量和分布特征
• 材料和方法
• 实验结果
• 实验二 糖尿病大鼠皮肤创面中P 物质的分布表达特点
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 P 物质对糖尿病大鼠难愈伤口的促愈作用及其机制初探
• 实验一 感觉神经肽P 物质对糖尿病大鼠难愈伤口的促愈作用
• 材料与方法
• 实验结果
• 实验二 糖尿病大鼠皮肤创面愈合过程中P 物质表达调控机制及其受体NK1、NK2的表达特点
• 材料及方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 缓释多囊脂质体型SP（Depo-SP）的制备及其在糖尿病难愈创面的应用研究
• 实验一 缓释多囊脂质体型SP（Depo-SP）的制备及体外释放性能的研究
• 材料与方法
• 实验结果
• 实验二 脂质体型SP 在糖尿病难愈伤口中的应用研究
• 材料及方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 第四部分 SP 的N 端6 肽对糖尿病大鼠难愈创面的促愈作用研究
• 8]SP-6 的设计原理及合成'>实验一[4（OH）Phe⁸]SP-6 的设计原理及合成
• 8]SP-6 对糖尿病大鼠难愈伤口的促愈作用'>实验二[4（OH）Phe⁸]SP-6 对糖尿病大鼠难愈伤口的促愈作用
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 全文结论
• 致谢
• 照片
• 参考文献
• 文献综述 糖尿病皮肤创面难愈的机制及促愈措施研究进展
• 参考文献
• 研究生在读期间发表论文