宫颈癌PEI-磁性纳米粒E1A基因放化疗增敏及其相关作用机制的实验研究

论文题目: 宫颈癌PEI-磁性纳米粒E1A基因放化疗增敏及其相关作用机制的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 申良方

导师: 张阳德

关键词: 纳米粒,细胞,基因,基因,放射疗法,化学疗法,裸鼠,基因,基因,细胞周期,敏感性

文献来源: 中南大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的探讨PEI-Fe3O4纳米粒基因载体的转运活性、E1A基因对人宫颈癌细胞生长的抑制作用和对放化疗的增敏作用及其相关的作用机制,为宫颈癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。方法 ①E1A基因经PEI-Fe3O4纳米粒介导转染人宫颈癌细胞（Hela细胞）,通过细胞计数法测绘生长曲线、计算倍增时间和软琼脂集落形成数目,观察E1A基因对该细胞体外增殖的影响。②用顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞,观察E1A基因对顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇等化疗药物敏感性的影响。③将未经转染的Hela细胞、转染空载体纳米粒的Hela细胞（Hela-vect）及转染E1A基因的Hela细胞（Hela-E1A）,分别给予0、2、4、6、8、10Gy的6MV-X线照射,通过测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对宫颈癌细胞放射敏感性的影响。④通过裸鼠致癌实验,观察了E1A基因对裸鼠移植癌生长的抑制作用。通过模拟E1A基因治疗的裸鼠实验,观察E1A基因对裸鼠移植瘤的化疗增敏作用。⑤使用流式细胞仪测定转染前后人宫颈癌细胞DNA含量,计算机分析细胞周期。观察E1A基因对细胞周期的改变。⑥用免疫细胞化学染色检测转染前后HER-2/neu基因的表达水平,观察E1A基因对HER-2/neu基因表达的影响;采用免疫组织化学染色检测转染前后肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因的表达水平,观察E1A基因对肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因表达的影响。结果 ①转染E1A基因的人宫颈癌细胞生长缓慢,倍增时间延长,是Hela-vect的1.53倍,是亲本细胞Hela的1.58倍;未经转染的Hela细胞、转染空载体纳米粒的Hela细胞及转染E1A基因的Hela细胞,细胞集落形成率分别为61.48%、58.20%和13.62%,E1A基因组明显低于Hela和Hela-vect组。与Hela及Hela-vect相比,集落形成抑制率分别为77.84和76.65%。②与未经转染的和转染空载体纳米粒的Hela细胞比较,Hela-E1A对放射线的敏感性提高了3倍左右,未经转染的和转染空载体纳米粒的Hela细胞对放射线的敏感性相近。③转染E1A基因的人宫颈癌细胞（Hela-E1A）对顺铂和紫杉醇的敏感性显著增加,与Hela和Hela-vect细胞比较,Hela-E1A细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性分别提高了10倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显。④裸鼠致癌实验结果显示:Hela-E1A细胞

论文目录:

摘要

Abstract

研究背景

第一章 E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响

摘要

Abstract

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 细胞培养

1．2．2 基因载体PEI-磁性纳米粒的制备

1．2．3 基因转染

1．2．4 E1A基因表达的鉴定

1．2．5 流式细胞仪测细胞周期

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 E1A基因的表达鉴定

2．2 流式细胞仪测细胞周期

3 讨论

第二章 PEI-Fe_3O_4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞体外增殖的影响

摘要

Abstract

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 PEI-Fe_3O_4纳米粒载体的制备、基囚转染、基因表达鉴定及细胞培养

1．2．2 转染前后人宫颈癌细胞HER-2／neu表达水平的检测

1．2．3 E1A基因对人宫颈癌细胞系生长速度的影响

1．2．4 软琼脂集落形成实验

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 E1A基因对HER-2／neu基因的影响

2．2 E1A基因对Hela细胞生长的影响

2．3 软琼脂集落形成实验

3 讨论

第三章 E1A基因对人宫颈癌细胞放射敏感性的影响

摘要

Abstract

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 PEI—Fe_3O_4纳米粒载体的制备、基因转染、基因表达鉴定及细胞培养

1．2．2 转染前后HER-2／neu表达水平的检测

1．2．3 E1A基因对人宫颈癌细胞放射敏感性的影响

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 E1A基因对HER-2／neu基因表达的影响

2．2 E1A基因的放疗增敏作用

3 讨论

第四章 E1A基因对人宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响

摘要

Abstract

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 PEI—Fe_3O_4纳米粒载体的制备、基因转染、基因表达鉴定及细胞培养

1．2．2 药物敏感性实验

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 不同浓度的顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇对Hela-E1A、Hela和Hela-vect细胞的杀伤作用

2．2 同一浓度的顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇对Hela-E1A、Hela和Hela-vect细胞杀伤作用的动态观察

3 讨论

第五章 E1A基因对裸鼠移植瘤生长的影响

摘要

Abstract

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 动物

1．1．3 主要试剂

1．1．4 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 PEI—Fe_3O_4纳米粒载体的制备、基因转染、基因表达鉴定及细胞培养

1．2．2 裸鼠致癌实验

1．2．3 免疫组织化学染色检测细胞凋亡及转染前后Survivin基因和Caspase-3基因的表达情况

1．3 统计学方法

2 结果

2．1 E1A基因对裸鼠出瘤时间、肿瘤体积和肿瘤生长曲线的影响

2．2 E1A基因对裸鼠肿瘤细胞凋亡的影响

2．3 E1A基因对活化的Caspase-3基因表达的影响

2．4 E1A基因对Survivin基因表达的影响

3 讨论

第六章 E1A基因对裸鼠移植瘤化疗敏感性的影响

摘要

Abstract

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 动物

1．1．3 主要试剂

1．1．4 主要仪器

1．2 实验方法

1．2．1 PEI-Fe3O4纳米粒的制备、基因表达鉴定及细胞培养

1．2．2 模拟E1A基因治疗的裸鼠实验

1．2．3 免疫组织化学染色检测细胞凋亡及转染前后Survivin基因和Caspase-3基因的表达情况

1．3 统计学方法

2 结果

2．1 E1A基因对裸鼠肿瘤化疗敏感性的影响

2．2 E1A基因对裸鼠肿瘤细胞凋亡的影响

2．3 E1A基因对活化的Caspase-3基因表达的影响

2．4 E1A基因对Survivin基因表达的影响

3 讨论

综述

1 E1A基因的结构及功能

1．1 腺病毒的一般特性

1．2 E1A基因的结构及功能

2 E1A基因与细胞转化的关系

3 E1A基因的抗肿瘤特性及机制

3．1 E1A对HER-2／neu过度表达的抑瘤作用

3．1．1 E1A下调HER-2／neu基因表达

3．1．2 E1A降低致瘤性

3．1．3 E1A抑制肿瘤转移

3．2 E1A基因对细胞凋亡的诱导

3．3 E1A基因激活p53基因诱导细胞凋亡

3．4 E1A基因与免疫系统的关系

3．5 E1A基因介导的旁杀伤效应

3．6 E1A基因对erbB-2高表达肿瘤的形成和转移的抑制作用

3．7 E1A基因对erbB-2非高表达肿瘤的形成和转移的抑制作用

3．8 E1A基因对肿瘤细胞放射治疗和化学治疗的增敏作用

3．8．1 E1A基因对肿瘤细胞化学治疗的增敏作用

3．8．2 E1A基因对肿瘤细胞放射治疗的增敏作用

4 E1A基因治疗的给药途径

5 E1A临床试用近况

6 E1A在肿瘤预防中的意义

致谢

攻读学位期间发表的论文

发布时间: 2006-03-28

参考文献

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