流感病毒多亚型检测方法的研制和应用

论文摘要

本研究利用分子生物学、病毒学和免疫学等技术和手段,旨在探索H3、H5、H7及H9血凝素亚型流感病毒抗原检测方法。本研究设计了4对针对流感病毒H3、H5、H7及H9血凝素亚型核酸序列的特异性引物,优化多元RT-PCR反应体系,并通过H3、H5、H7及H9亚型血凝素基因在PBV220载体中的原核表达获得同步阳性对照,建立了四种亚型一步法RT-PCR分型检测方法;制备并纯化了流感病毒H3、H5、H7及H9血凝素亚型单克隆抗体,加之阳性标准血清,通过反应条件的优化,建立了抗原捕获ELISA方法,完成了检测试剂盒的组装。本研究有以下创新点:实现了流感病毒H3、H5、H7及H9血凝素亚型在一个反应体系中、经一次操作进行检测;将检测对象由禽扩大到人和其它哺乳动物;将PBV220原核表达产物中的RNA用作RT-PCR方法中的实时阳性对照;利用亲和层析法获得了四种亚型高纯度的单克隆抗体;首次建立了H3和H7亚型抗原捕获ELISA方法。研究证明,建立的方法对H3、H5、H7及H9血凝素亚型流感病毒的检测具有高度的特异性、敏感性和安全性,对流感病毒血凝素亚型抗原的检测和区分具有一定的指导意义,为早期发现流感病毒对人、禽的感染提供了实际应用基础。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 禽流感与禽流感病毒研究进展
• 1.1 概述
• 1.2 AI的流行及危害
• 1.3 AIV概述
• 1.4 AIV的生物学特性
• 1.5 AI的临床表现与病理变化
• 1.6 AI的流行病学
• 1.7 AIV的致病性及毒力
• 1.8 AIV的分子生物学特性
• 1.9 AIV的免疫性
• 1.10 AI的防治
• 第2章 禽流感病毒检测技术及方法的研究进展
• 2.1 概述
• 2.2 主要检测方法及研究进展
• 2.3 展望
• 第二篇 研究内容
• 第1章 流感病毒H3、H5、H7、H9亚型分型RT-PCR检测方法的建立
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第2章 流感病毒H3、H5、H7、H9亚型血凝素基因在pBV220中的表达及产物分析
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第3章 流感病毒H3、H5、H7、H9亚型一步法分型RT-PCR检测试剂盒的组装及应用
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第4章 流感病毒H3亚型血凝素基因单克隆抗体的制备及纯化
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第5章 流感病毒H3、H7亚型ELISA诊断试剂盒的组装
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
• 后记和致谢
• 中文摘要
• 英文摘要