糖尿病谷氨酸脱羧酶(GAD65)反应性T细胞的检测及应用研究

糖尿病谷氨酸脱羧酶(GAD65)反应性T细胞的检测及应用研究

论文摘要

目的:建立糖尿病谷氨酸脱羧酶(GAD65)反应性T细胞ELISPOT检测的优化方案。 方法:选取经典T1DM(T1A)患者、特发T1DM(T1B)患者及健康对照者(Control)各2例,2型糖尿病(T2DM)患者3例;连续梯度离心分离外周单个核细胞(PBMC);参照U-CyTech公司(荷兰)的ELISPOT标准方案冻存、复苏PBMC及斑点检测,包括分泌IFN-γ的Th1斑点(IFN-γ-Th1)及分泌IL-4的Th2斑点(IL-4-Th2);观察不同孵育法、孵育时间、刺激抗原、细胞数及新鲜或冻存细胞等对斑点的影响,并对其进行重复性评价。 结果:①直接法与预育法检测IFN-γ-Th1、IL-4-Th2斑点无显著差异(P>0.05),但直接法较为简便;②5μg/ml T cell-GAD65刺激36h为最佳浓度及孵育时间;③3.5×105/100μl/孔的PBMC细胞浓度所形成IFN-γ-Th1与IL-4-Th2斑点数较多;④T cell-GAD65刺激所得的IFN-γ-Th1斑点数明显高于同浓度(5 μg/ml)及20μg/ml非专用于T细胞检测的重组蛋白GAD(P<0.05);⑤按程序冻存及复苏的PBMC与新鲜分离的PBMC所形成的IFN-γ-Th1及IL-4-Th2斑点数无差别

论文目录

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  • 缩略词
  • 论文正文
  • 前言
  • 65反应性T细胞ELISPOT检测方法的建立'>第一部分 GAD65反应性T细胞ELISPOT检测方法的建立
  • 对象和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 65反应性T细胞ELISPOT检测在糖尿病发病机制探讨中的应用'>第二部分 GAD65反应性T细胞ELISPOT检测在糖尿病发病机制探讨中的应用
  • 对象和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 65反应性T细胞ELISPOT检测在糖尿病分型诊断中的应用'>第三部分 GAD65反应性T细胞ELISPOT检测在糖尿病分型诊断中的应用
  • 对象与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 3对1型糖尿病Th1细胞及Th1/Th2平衡的调节作用及机制'>第四部分 1α,25二羟维生素D3对1型糖尿病Th1细胞及Th1/Th2平衡的调节作用及机制
  • 对象和方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 结语
  • 综述
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要的研究成果
  • 相关论文文献

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