论文摘要
研究背景:氩氦刀（argon-helium cryosurgical ablation system,CSA）是一种新的冷冻外科（cryosurgery）治疗手段,其基本原理是利用氩气快速制冷产生的超低温（<-140℃）作用于病变组织引起细胞内外冰晶形成、细胞脱水,氦气快速复温（20-40℃）,导致肿瘤组织细胞坏死。目前这种微创外科技术是无法切除的中晚期HCC最为主要的局部治疗方法。氩氦刀除了对肿瘤的直接清除作用外,还能增强术后的抗肿瘤免疫。近年研究发现,肿瘤周围有大量CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞（reguolatory T cells.Treg）浸润,通过抑制或杀伤效应性CD8+或CD4+T细胞而抑制机体的抗肿瘤免疫;相反,通过去除荷瘤鼠体内的Treg细胞可使抗肿瘤作用增强。我们的前期研究显示,调节性T细胞数量的升高与HCC患者预后较差有关。本研究通过氩氦刀冷冻治疗HCC患者,了解冷冻治疗对HCC患者调节性T细胞表达的影响,同时探索调节性T细胞变化对HCC患者预后的影响及其意义。方法:利用流式细胞仪检测101例HCC患者外周血调节性T细胞频率,同时对34例HCC病人进行氩氦刀治疗,随访治疗前后调节性T细胞频率及功能的变化,分析调节性T细胞频率变化与血清AFP水平之间的相关性,同时在治疗前后取原位肝癌组织进行免疫组化检测CD4、CD8和FoxP3。结果:我们观察到: （1）随着肝癌的进展,外周血中调节性T细胞频率逐渐增加,早期、中期、进展期、终末期HCC患者的Treg频率分别为6.89±1.27%,9.13±1.36%,10.32±2.04%和13.4±2.81%。（2）氩氦冷冻治疗后肿瘤缓解的17例HCC病人,随访结束时其Treg频率较术前降低,其中7例术前AFP阳性（>20ng/mL）的患者,术后Treg频率亦随AFP的降低而降低;对于肿瘤进展的14例HCC病人,随访结束时其Treg频率较术前明显升高,其中9例术前AFP阳性（>20ng/mL）的患者,肿瘤进展时亦伴有AFP的再次升高。（3）在治疗前后HCC患者Treg细胞对于健康人PBMC均有免疫抑制功能,其免疫抑制功能与是否治疗及肿瘤是否进展无关。（4）氩氦冷冻治疗后HCC患者冷冻区域旁肿瘤组织浸润的CD8+T细胞、CD4+T细胞和FoxP3+T细胞的数量均显著低于术前,治疗后的FoxP3+/CD8+比值较术前明显降低。结论:氩氦冷冻消融治疗可降低HCC患者Treg频率,Treg频率的变化具有判断HCC病人肿瘤是否进展的意义,尤其是AFP阴性的HCC病人。
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