论文摘要
DF喷雾剂是以中华三叶委陵菜等中药组成，根据民间验方制成的中药液体喷雾剂。临床上用于治疗病毒性带状疱疹，具有清热解毒，敛疮止血的功效。本课题按照中药新药研究技术要求对该制剂的制备工艺、质量标准、初步稳定性进行了系统的实验研究，并对中华三叶委陵菜药材的质量标准进行了初步研究。一．制备工艺的研究在提取工艺方面，以总浸出物收率以及君药中华三叶委陵菜中活性鞣质和有效成分儿茶素提取量为考察指标，采用紫外分光光度法测定活性鞣质含量，HPLC法测定儿茶素含量，分别考察了溶剂、粒度、乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比等单因素对提取效果的影响，并在此基础上，利用L9（34）正交试验法分别对乙醇回流提取工艺与乙醇渗漉提取工艺的条件进行了优选。结果表明药材提取的优选条件为：将原药材粉碎成8～10目粒度，补足1.5倍量的吸水量，加60％乙醇溶液100mL，浸泡24h，按溶剂10倍量，渗漉流速10mL·min-1·kg-1进行渗漉提取。制剂成型工艺方面，对制剂的乙醇浓度、矫味剂的种类与用量、增溶剂的种类与用量、辅料的加入方式和顺序分别做了单因素考察，并在此基础上，利用紫外分光光度法测定活性鞣质含量，HPLC法测定儿茶素含量，以外观与含量相结合的综合指标，采用L9（34）正交试验法，考察了乙醇浓度，薄荷脑用量，丙二醇用量3个主要影响因素，优选出制剂成型工艺的条件。结果表明：以5％的丙二醇碾融2‰的薄荷脑，用低浓度的乙醇溶液溶解后，加入药材渗漉液中混匀，调节含醇量为50％，药材：药液=1：12所制成品各项指标均理想。二．制剂质量标准研究采用薄层层析法对制剂中儿茶素、没食子酸、薄荷脑分别进行了鉴别，结果斑点分离效果好、阴性对照无干扰，图谱清晰；应用药典方法分别对制剂的相对密度、pH值、含醇量、装量差异、喷射试验进行了检查，结果表明：制剂相对密度应在0.94～0.95之间，pH应在4.5～5.5之间，每瓶喷出总量不得少于26.00g，每10钦的喷射量应在1.31g～1.60g之间；在样品含量测定纯化工艺研究的基础上，采用干酪素法测定制剂中鞣质含量，检测波长760nm；采用HPLC法测定制剂中儿茶素含量，色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18（4.6×250mm，5μm），流动相：甲醇-水-冰醋酸（15：81：1），流速=0.9mL／min，柱温30℃，检测波长278nm；采用GC法测定制剂中乙醇与丙二醇含量，色谱条件：色谱柱：DB-WAX毛细管柱（30m×0.319mm×0.25μm），进样口温度：240℃，检测器温度为240℃，不分流，程序升温：柱初温45℃，保持4.5min，以每分钟10℃升温至200℃，保持3min；采用GC法测定制剂中薄荷脑含量，色谱条件：色谱柱：DB-WAX毛细管柱（30m×0.319mm×0.25μm），进样口温度为225℃，检测器温度为240℃，不分流，程序升温：柱初温100℃，保持1min，以每分钟5℃速率升至160℃，保持1min。测定结果表明：鞣质的浓度线性范围为0.928μg～4.640μg；儿茶素的浓度线性范围为0.64gg～3.20μg，12h内稳定性RSD=3.21％；乙醇的浓度线性范围为1.58×10-2μg～4.74×10-2μg，丙二醇的浓度线性范围为1.608×10-3μg～4.824×10-3μg，薄荷脑的浓度线性范围为0.02μg～0.2μg，24h内稳定性RSD=1.72％；以上方法精密度的RSD值分别为0.70％、2.77％、0.60％、2.37％、1.77％；重复性的RSD值分别为2.16％、1.73％、1.93％、1.32％、2.24％；在儿茶素、乙醇、丙二醇、薄荷脑含量测定中，平均回收率分别为99.00％、99.88％、101.99％、100.72％，RSD分别为1.40％、0.94％、1.93％、2.67％，以上所用定量方法准确、简便、可靠，可用于制剂中相应成分的含量测定。三．制剂初步稳定性的研究考察了制剂在自然贮存条件下的初步稳定性。即将样品制剂在临床用包装条件下，于自然储存条件进行三个月的考察，每月均检查质量标准中所列的全部项目。结果表明，除鞣质和儿茶素含量逐月略有下降以外，其他检查结果均符合规定。说明应考虑向其中加入适宜的抗氧化剂，改进处方组成，防止有效成分的氧化变质。四．中华三叶委陵菜药材质量标准的研究对君药中华三叶委陵菜药材中所含儿茶素与没食子酸成分进行了薄层色谱鉴别，结果表明，斑点分离效果好、阴性对照无干扰，方法专属性强。对药材中重金属、砷盐、灰分及酸不溶性灰分进行了检查，并制定相关的质量标准，结果表明：药材重金属含量小于20ppm，砷盐含量小于2ppm，总灰分含量小于4％，且未检测出酸不溶性灰分；采用干酪素法测定药材中鞣质含量，检测波长760nm；采用HPLC法测定药材中儿茶素含量，色谱条件：色谱柱：Agilent ZorbaxSB-C18（4.6×250mm，5μm），流动相：甲醇-水-冰醋酸（15：81：1），流速=0.9mL／min，柱温30℃，检测波长278nm；结果：鞣质的浓度线性范围为0.928μg～4.640μg；儿茶素的浓度线性范围为0.64μg～3.20μg，12h内稳定性RSD=2.48％，平均回收率为99.38％，RSD=1.05％，以上两法的精密度RSD值分别为0.32％、1.14％，重复性RSD值分别为1.97％、1.92％，以上结果说明定量方法准确、可靠，可用于药材各成分含量的测定。此外，还采用HPLC法，检测了6个不同批次中华三叶委陵菜药材的HPLC色谱图，在采集图谱均满足相关技术要求、方法学考察合格的基础上，分别进行了个体样本与样本均值对照图谱的比对与相关性分析，各样品之间亲缘距离的分析，以及利用SPSS10.1软件对样品进行聚类分析，并得到聚类谱系图。从结果可以看出恩施产3批药材与达州产药材亲缘关系较近，而宣恩与利川产药材作为另一类明显区别于前者。对药材指纹特征图谱的研究，不仅反映了样品整体的特征，同时还反映了样品之间的亲疏程度，为中华三叶委陵菜药材各品种之间的质量评价提供了一定理论参考。借助DF喷雾剂的研究，笔者对中药液体喷雾剂工艺合理性以及质量评价的研究具有一定代表性，为提高中药液体喷雾剂质量、丰富中药液体喷雾剂研究内容提供了参考，为中药液体喷雾剂的研制以及寻找存在问题的解决提供了一定借鉴和依据。
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