一株拮抗性芽孢杆菌的鉴定及防治莴苣菌核病效果和机制研究

论文摘要

本研究得到一株对核盘菌具有强烈拮抗作用的菌株Bs9-1,通过生理生化和16SrDNA序列测定,确定该菌株Bs9-1属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（GenBank Acc.NO.EU753871）。菌株Bs9-1的发酵产物和发酵物离心上清液对核盘菌菌丝扩展的抑制率分别达81.3%和78.3%。被抑制的核盘菌菌丝原生质呈现颗粒化、细胞质外渗。这种细菌产生的抗菌物质能够延迟核盘菌菌核萌发,并能抑制核盘菌子囊孢子萌发。除核盘菌外,菌株Bs9-1还能抑制玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、稻瘟病菌、灰葡灰霉菌和水稻纹枯病菌等植物病原真菌。菌株Bs9-1产生的抗菌物质能抵抗40℃～100℃的热处理,但对121℃热处理敏感。这种抗菌物质在弱酸性及中性条件下活性最高。采用特异性引物介导的PCR方法,从菌株Bs9-1基因组DNA中检测到表面活性素合成酶基因（sfp）和伊枯草菌素合成酶基因（ituA）,但没有检测到芬枯草菌素合成酶基因（fenB）。在温室条件下,菌株Bs9-1发酵物及其发酵物离心上清液对核盘菌侵染莴苣叶片显示明显的防治效果,防效分别为78.2%和81.2%,而细菌菌体却没有明显防效（8.2%）。上述研究结果为利用菌株Bs9-1防治莴苣菌核病奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 莴苣菌核病病原菌核盘菌和生防菌枯草芽孢杆菌的研究进展
• 1 莴苣菌核病病原菌核盘菌的研究进展
• 1.1 莴苣菌核病的危害及分布状况
• 1.2 核盘菌的生物学特性
• 1.3 核盘菌的致病机制
• 1.4 核盘菌菌核病的防治
• 2 芽孢杆菌的生防应用及其作用机理
• 2.1 芽孢杆菌的生防应用
• 2.2 芽孢杆菌的生态学特性
• 2.3 芽孢杆菌的生防机理的研究现状
• 2.3.1 营养和空间位点的竞争
• 2.3.2 拮抗作用
• 2.3.3 诱导植物抗性
• 2.3.4 促进植物生长
• 2.4 芽孢杆菌研究存在的问题及其展望
• 3 本研究的目的、内容及意义
• 3.1 研究目的
• 3.2 研究内容
• 3.3 本项研究的意义
• 第二章 对莴苣菌核病有拮抗作用的生防菌的分离和筛选
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 候选菌株的分离
• 1.2.2 细菌的活化和培养
• 1.2.3 平板对峙培养试验
• 1.2.4 离体叶片筛选
• 2 结果与分析
• 2.1 拮抗菌株的分离
• 2.2 平板对峙培养试验
• 2.3 离体叶片筛选
• 3 小结与讨论
• 第三章 芽孢杆菌Bs9-1的鉴定
• 1 材料和方法
• 1.1 供试菌株及试剂
• 1.2 常规鉴定
• 1.2.1 菌落和菌体的形态观察
• 1.2.2 生理生化性状测定
• 1.3 16S rDNA序列测定比较鉴定
• 1.3.1 16S rDNA序列测定
• 1.3.2 16S rDNA序列分析
• 1.4 枯草芽孢杆菌Bs9-1生物学特性
• 1.4.1 温度对Bs9-1生长和繁殖的影响
• 1.4.2 pH值对Bs9-1菌株生长和繁殖的影响
• 2 结果与分析
• 2.1 常规鉴定
• 2.1.1 菌株Bs9-1菌落特征
• 2.1.2 菌体形态观察
• 2.1.3 生理生化鉴定
• 2.2 16S rDNA序列测定比较鉴定
• 2.2.1 Bs9-1菌株的16S rDNA序列扩增
• 2.2.2 16S rDNA的序列分析及其系统发育树
• 2.3 枯草芽孢杆菌Bs9-1生物学特性研究
• 2.3.1 pH值对Bs9-1菌株生长的影响
• 2.3.2 温度对Bs9-1菌株生长的影响
• 3 小结与讨论
• 第四章 枯草芽孢杆菌Bs9-1对核盘菌病菌的抑制作用
• 1 材料和方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 Bs9-1发酵上清液对核盘菌菌丝生长的抑制作用
• 1.2.2 Bs9-1发酵上清液对核盘菌菌核萌发的抑制作用
• 1.2.3 Bs9-1发酵上清液对核盘菌子囊孢子萌发的抑制作用
• 1.2.4 数据统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 Bs9-1发酵上清液对核盘菌菌丝生长的抑制作用
• 2.2 Bs9-1发酵上清液浓度与抑菌活性的关系
• 2.3Bs9.1发酵物上清液对核盘菌菌核萌发的抑制作用
• 2.4 Bs9-1发酵上清液对核盘菌子囊孢子萌发的抑制作用
• 3 小结与讨论
• 第五章 枯草芽孢杆菌Bs9-1防治莴苣菌核病菌的机理及效果
• 1 材料和方法
• 1.1 材料与试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 Bs9-1菌株对草酸毒素的降解作用
• 1.2.2 Bs9-1菌株的根际促生作用（土壤拌种）
• 1.2.3 Bs9-1菌株产生的拮抗物质对莴苣菌核病菌的抑制作用
• 2 结果与分析
• 2.1 Bs9-1菌株对草酸的降解作用
• 2.2 Bs9-1菌株的根际促生作用（PGPR）（土壤拌种）
• 2.3 Bs9-1菌株产生的拮抗物质对莴苣菌核病菌的抑制作用
• 3 小结与讨论
• 第六章 枯草芽孢杆菌Bs9-1菌株产生抗真菌物质的特性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料与试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 Bs9-1菌株抑菌谱测定
• 1.2.2 菌株Bs9-1产生的抗真菌物质的热稳定性分析
• 1.2.3 菌株Bs9-1产生的抗真菌物质对酸碱的稳定性
• 1.2.4 菌株Bs9-1抗真菌物质合成基因的检测
• 2 结果与分析
• 2.1 Bs9-1菌株的抑菌谱
• 2.2 菌株Bs9-1产生的抗真菌物质的热稳定性分析
• 2.3 菌株Bs9-1产生的抗真菌物质对酸碱的稳定性
• 2.4 菌株Bs9-1产生抗真菌物质相关基因的检测
• 3 小结与讨论
• 参考文献
• 致谢