冠心康对同型半胱氨酸诱导内皮细胞氧化损伤作用的实验研究

论文摘要

目的:高同型半胱氨酸血症（HHcy）是动脉粥样硬化（AS）发生的一个独立危险因素。但其致AS的具体分子机制还不十分清楚。目前多数研究认为,高同型半胱氨酸（HCY）导致血管内皮功能损害,是AS发生的始动环节。故深入研究HHcy对血管内皮细胞功能的损伤机制尤为重要。众所周知,血管内皮细胞可以合成和分泌血管舒张因子一氧化氮（NO）和收缩因子内皮素（ET）。正常情况下,两者保持平衡与稳定,来维持血管的舒张状态。当内皮细胞受损时,NO的生成和释放缺陷,平衡倾向于ET,从而导致体内血管收缩呈优势,舒张功能下降。而血管舒张功能降低是AS最早的表现。有研究显示,生理情况下,NO是由内皮细胞经内皮型一氧化氮合酶（eNOS）专一性催化左旋精氨酸生成;而血管ET系统也以内皮细胞产生的内皮素-1（ET-1）为主要表达。另有实验表明,HCY可导致内皮细胞分泌活性氧（ROS）,ET-1明显升高,生成NO下降。推测HCY能影响血管内皮细胞ROS、NO、ET-1的表达。本研究对培养的HUVECS施以不同浓度HCY处理后,检测其ROS、NO、ET-1的水平,借以证明HCY对血管内皮细胞功能的损伤,进而探讨中药冠心康在HCY所致AS中的保护作用。方法:制备动物血清。体外培养的HUVECs,随机分为4组:（1）正常对照组;（2）模型组:HCY组（加入终浓度为0.25、0.5、1.00、2.00mmol/L）;（3）中药组:预先加入终浓度为1.00mmol/L的HCY孵育2h,然后加入10%中药血清;（4）西药组（氟伐他汀组）:预先加入终浓度为1.00mmol/L的HCY孵育2h,然后加入10%西药血清;继续培养24h,每组设6个复孔。用HCY和药物干预细胞24小时后,流式细胞仪检测细胞内ROS水平;采用酶联免疫吸附法测定细胞ET-1、NO含量。结果:模型组作用于HUVECs 24小时,ROS和ET-1显著高于正常对照组（7.80±1.19、15.37±1.27、21.00±2.65、35.56±2.96对照2.96±0.53;87.67±10.95、122.29±8.13、139.03±5.39、166.48±13.12对照40.61±0.64;P<0.05）,NO含量显著降低（185.97±15.36、147.75±15.86、115.22±10.98、80.54±9.93对照214.09±18.38;P<0.05）;HCY呈浓度依赖性地显著增加ROS生成及ET-1释放,且明显抑制NO的生成（P<0.05）。冠心康颗粒与氟伐他汀与HCY1.0组相比明显延缓了HCY致AS的进程,抑制了ROS、ET-1的释放（3.77±0.60、10.89±0.72对照21.00±2.65,46.18±5.96、74.35±4.26对照139.03±5.39;P<0.05）,增加了NO的分泌（203.95±12.85、186.68±18.35对照115.22±10.98;p<0.05）。结论:1.HUVECs体外培养是构建血管内皮细胞模型比较好的实验手段,采用载药血清研究中药的作用机制是目前较先进的科研方法之一。2.HCY显著促进体外培养的HUVECs ROS生成、ET-1的释放,抑制NO生成,在一定的浓度范围内（0.25mol/L～2.0mol/L）呈浓度依赖性,对HUVECs具有致损伤作用。3.冠心康颗粒和氟伐他汀能够抑制HCY诱导HUVECs的ROS生成、ET-1的释放,促进NO的生成,而且可以延缓和保护HCY体外诱导HUVECs损伤,具有抗AS的作用。4.冠心康是通过多种途径、多靶点完成抗动脉粥样硬化的作用。中药冠心康颗粒比氟伐他汀在抗AS中具有更为明显的优势。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢