论文题目: 人乳头瘤病毒16E6/7转基因小鼠模型的建立及HPV16DNA疫苗的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 高慧
导师: 李厚达
关键词: 基因,转基因小鼠,疫苗,免疫
文献来源: 扬州大学
发表年度: 2005
论文摘要: 人乳头瘤病毒(HPV)是一组具有组织特异的双链DNA肿瘤病毒,能引起上皮和粘膜组织增生,主要通过直接或间接接触污染人的皮肤、粘膜组织,其中尖锐湿疣是HPV感染引起的常见性传播性疾病,感染率高、传染性强。目前研究认为,高危型HPV感染是宫颈癌发生发展的必要因素,特别HPV16在富颈癌组织中检出率最高,可达50%。HPV感染性疾病、宫颈癌在现今条件下仍无特效的预防和治疗方法,加之体外很难获得大量HPV病毒粒子,也无HPV自然感染的动物模型可以利用,限制了对HPV的深入研究及其防治性疫苗的研制开发。 为了建立HPV致病性和疫苗评价研究的动物模型,建立适合国内推广的防治HPV感染的疫苗株,我们从国人宫颈癌组织中提取DNA,分离HPV16E6E7、L1基因,建立E6E7转基因小鼠模型和L1抗原表达移植瘤模型,构建真核表达重组质粒pcDNA-L1、pcDNA-E7,免疫小鼠测定其免疫效力。观从以下四个方面概述: 一、HPV16型E6/7、L1基因的克隆和序列分析 从感染HPV16型的宫颈癌组织中提取组织DNA,根据已发表的HPV16标准株DNA全序列设计跨HPV16 E6/7、L1整个阅读框,包含起始密码子和终止密码子的两对特异性引物,以提取的DNA为模板,PCR法扩增HPV16E6/7、L1基因,并以pGgM-Teasy为克隆载体,按常规方法构建重组质粒pGEM-T-E6/7、pGEM-T-L1,经蓝白斑筛选和限制性核酸内切酶及核苷酸序列分析。结果显示我们分离、克隆的HPV16分离株E6/7、L1基因与已报道的标准株(德国)序列存在高度同源性。其中E6基因在核苷酸、氨基酸序列上都与标准株完全一致:E7基因与标准株仅在核苷酸序列上有一处突变,即199位的T→C,密码子由TTG变为CTG,而氨基酸序列未发生改变;L1基因与标准株在核苷酸序列上有7处不同,其中4处由于核苷酸的改变,其编码氨基酸也相应发生变化,即标准株序列6,240处的C→G,核苷酸三联密码TCA变为TGA,编码氨基酸由组氨酸(H)变为天门冬氨酸(D):6,432
论文目录:
符号说明
综述一：HPV分子生物学研究进展
综述二：HPV感染动物模型的研究进展
第一章 分离株HPV16型E6／7、L1基因克隆和序列分析
1．材料和方法
2．结果
3．讨论
4．参考文献
第二章 HPV16E6／7转基因小鼠的模型建立
1．材料和方法
2．结果
3．讨论
4．参考文献
第三章 分离株HPV16L1DNA疫苗免疫保护作用研究
1．材料和方法
2．结果
3．讨论
4．参考文献
第四章 分离株HPV16E7DNA疫苗的免疫研究
1．材料和方法
2．结果
3．讨论
4．参考文献
结论
致谢
攻读期间发表的学术论文目录
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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