小鼠止血带休克后肾组织ACE/ACE2的表达变化与肾损伤的关系

论文摘要

各种原因所致休克的机制极为复杂,其中体液因素很可能是导致休克微循环紊乱、多器官损伤的重要基础。肾素-血管紧张素系统（rennin angiotensin system, RAS）在维持机体血压和水钠平衡中发挥着重要作用。既往人们认为,休克时血管紧张素转换酶（ACE）催化的缩血管通路过度激活,可产生大量血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,引起血管收缩,加重局部器官缺血缺氧,导致局部组织器官病理损伤。近年来研究发现,RAS系统还存在另外一条由血管紧张素转换酶2（ACE2）催化的舒血管通路,能够分解AngⅡ,产生具有舒血管作用的Ang（1-7）,改善休克时器官缺血状态,在休克时局部器官的损伤中发挥保护作用。目的本研究以小鼠止血带休克（ToS）为模型,通过观察野生型（WT）、ace2转基因（ace2 TG）、ace2基因敲除（ace2 KO）小鼠ToS后ACE、ACE2的表达变化与ToS后肾损伤的关系,探讨RAS稳态失衡在ToS肾损伤发病中的作用。方法1.选取42只野生型ICR小鼠,体重45±5g,平均分为7组,1个对照组和6个时间点缺血再灌注组。采用我室常规复制小鼠ToS模型,用止血带结扎小鼠双后肢,阻断血流2h后剪断止血带,分别于再灌注后0.5h、1h、2h、4h、6h、12h处死小鼠取血清和肾组织,对照组不结扎双后肢,其余操作同模型组。Western blot测定一侧肾组织ACE和ACE2蛋白的表达;利用化学比色方法测定血清和肾组织SOD活性、MDA含量、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量;另一侧肾组织制作病理切片,观察肾组织形态变化,并利用免疫组织化学方法观察ACE和ACE2的表达变化。2.利用PCR法筛选ace2 TG和ace2 KO小鼠。3.选取WT、ace2 TG和ace2 KO小鼠各6只,分别制作ToS模型,缺血2h再灌注4h后取血清和肾组织。Western blot测肾组织ACE和ACE2蛋白的表达;利用化学比色方法测定肾组织MDA含量、SOD活性和血Cr、BUN的含量;一侧肾组织制作病理切片,用于观察肾组织形态变化。结果1. Western blot结果显示:与对照组比较,休克后各时间点ACE表达升高,ACE2表达降低;于灌注后24h二者失衡最显著。2. HE病理切片显示:对照组的肾组织结构清晰,各时间点再灌注组肾组织都有不同程度损伤,表现为肾小管上皮细胞水肿,炎性细胞浸润,偶见上皮细胞坏死,间质水肿,再灌注后4-12h损伤较为严重。3.与对照组比较,各时间点的肾MDA含量增高（P<0.05）,SOD活性降低（P<0.05）。与对照组相比,各时间点组的血Cr和BUN均升高（P<0.05）。4.免疫组化结果显示:ACE在肾小管上皮细胞胞浆表达,再灌注后表达明显增强;ACE2主要在肾小管上皮细胞管腔膜上表达,再灌注后表达明显降低。5. ace2基因敲除后,小鼠ACE表达增加;ace2基因转入小鼠体内后,肾组织ACE表达无明显变化。6.与WT小鼠比较,缺血2h再灌注后4h时,ace2 KO小鼠ToS后ACE、ACE2表达变化进一步失衡,肾组织氧化应激和肾功能损伤明显加重,肾组织病理改变进一步恶化;ace2 TG小鼠肾组织氧化应激和肾功能损伤减轻,肾组织病理变化改善。结论1. ToS后肾组织ACE表达升高,ACE2表达降低,二者比值失衡可能与休克肾损伤的发生有关。2. ToS后,肾组织ACE、ACE2的表达失衡可能通过氧化应激机制导致肾损伤而影响肾功能。3. ACE2可能在止血带休克所致肾损伤中发挥保护作用,以ACE2为靶点恢复RAS稳态可做为治疗ToS急性肾损伤的策略之一。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写
• 第一部分 野生小鼠ToS 后肾ACE/ACE2 的表达变化与肾损伤的观察
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 ACE2基因敲除和ACE2转基因小鼠ACE/ACE2的表达变化及ToS后肾损伤的反应
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 全文总结
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历