Gadd45a高表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响

论文摘要

恶性肿瘤严重威胁人类健康,亟需发展多种治疗方法改善肿瘤的预后。Gadd45a,在生长抑制和DNA损伤中具有重要作用,参与细胞生长的负性调控,瞬时转染Gadd45家族成员（Gadd45a,Gadd45g）可诱导肿瘤细胞的凋亡产生。本研究以腺病毒为载体,将Gadd45a导入胰腺癌细胞分析Gadd45a对胰腺癌细胞产生的生物学影响,分析Gadd45a对不同作用机制化疗药物的增效作用以及细胞p53状态对Gadd45a表达的影响;验证了Ad-G45a在裸鼠PANC1移植瘤上的抑制作用。结果:成功构建了表达Gadd45a的重组腺病毒Ad-G45a,经感染在四种人胰腺癌细胞（MIA PaCa-2,P3,PANC1,SW1990）中均可高效率表达。经测序分析未发现四种胰腺癌细胞的Gadd45a的cDNA有突变;在四种胰腺癌细胞系中PANC1的Gadd45a本底表达最高,但与细胞的恶性度没有明显相关性。以PANC1为研究对象,将Ad-G45a导入细胞后,细胞生长、侵袭和转移等恶性表型均受到明显抑制;Ad-G45a诱导细胞G2/M期阻滞具有明显的时效性和量效性;通过DAPI染色,annexinV,Westernblot等方法证实Gadd45a导入PANC1后通过激活Caspase9,诱导细胞凋亡。在PANC1细胞中证实Ad-G45a与化疗药物（cDDP,VP-16,5FU）合用有协同作用,以cDDP协同效应最为显著。外源Gadd45a的导入可提高野生型p53的表达水平,并诱导p53依赖的内源Gadd45a表达;VP-16在野生型p53的存在下可增强Ad-G45a诱导的内源Gadd45a表达。裸鼠PANC1移植瘤实验结果表明Ad-G45a具有明显抑瘤作用,抑瘤率达74.8%。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 研究方法
• 3 实验结果
• 3.1 病毒穿梭质粒pDC316-G45a的构建与鉴定
• 3.2 重组腺病毒的鉴定、扩增及滴度测定
• 3.3 细胞内Gadd45a表达水平的检测
• 3.4 Gadd45a抑制肿瘤细胞的生长转移
• 3.5 Gadd45a诱导细胞凋亡
• 3.6 Gadd45a提高化疗药物敏感性
• 3.7 Ad-G45a导入细胞后Gadd45a的表达强度与p53状态有关
• 3.8 Ad-G45a抑制肿瘤生长的体内实验
• 4 讨论
• 4.1 研究背景及立题依据
• 4.2 结果讨论
• 5 全文总结
• 论文综述
• 参考文献
• 致谢
• 简历