论文摘要
目的:针对人参及鹿茸中含量较高的蛋白质,摸索建立一条快速、简单、高效的人参鹿茸蛋白纯化工艺路线,为日后人参、鹿茸蛋白的结构与功能研究和新药开发打下基础。方法:采用中性缓冲液抽提和硫酸铵分级沉淀法提取总蛋白,应用超滤,亲和层析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等现代生物技术进行分离、纯化;经SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱对所纯化蛋白进行鉴定。结果:1、本文建立了动植物蛋白的分离纯化工艺路线和方法,并在人参和鹿茸中分离纯化了9种电泳和高效液相纯度的蛋白成分。其中,从人参中分离纯化出5种蛋白质,从鹿茸中分离纯化出4种蛋白质。2、从鹿茸中纯化的蛋白的收率都在75%以上;从人参中纯化的蛋白除GP1和GP2以外,收率都在80%以上。3、人参蛋白GP1为单亚基蛋白,分子量为25kDa;GP2为单亚基蛋白,分子量为65kDa;GP3为单亚基蛋白,分子量为15kDa;GP4为糖蛋白,分子量为66kDa。包含两个亚基分子量分别为29kDa和27kDa;GP5为单亚基蛋白,分子量为8kDa;4、鹿茸蛋白DAP-1为异源四聚体,分子量为140kD。包含两个亚基分子量分别为50kDa和27kDa;DAP-2为同源二聚体,分子量为120kDa。亚基分子量为64kDa;DAP-3为同源二聚体,分子量为28kDa。亚基分子量为13kDa;DAP-4为单亚基蛋白,分子量为6kDa。5、9种蛋白中,GP1为类RNA酶,GP3为壳多糖酶样蛋白,GP4为人参核糖核酸酶;2种人参蛋白GP2和GP5以及4种鹿茸蛋白DAP-1、DAP-2、DAP-3和DAP-4,均为首次报道,其性质有待于进一步研究。结论:本研究针对两种重要中药材—人参、鹿茸,以药材中的含量较高的大分子蛋白质成分为研究对象,采用先进的生物技术,建立了分离纯化路线和方法,并分离纯化出9种蛋白。本文所建立的分离纯化技术路线和方法克服了以往同类研究中所存在的技术水平较低,工艺不合理、收率较低、纯度不高的问题,可同时纯化多种蛋白,快速、简单、高效。