MPO对THP-1细胞泡沫化的影响和相关机制的实验研究

论文摘要

目的:观察髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）对低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）的作用和对THP-1单核巨噬细胞泡沫化的影响和可能的机制。方法:不同浓度的MPO（0.5、1、1.5、2、2.5u/L、）与LDL孵育;不同浓度MPO浓度（0.5、1、1.5、2、2.5u/L）加入过氧化氢（hydrogendioxide,H2O2）与LDL共孵育,TBA法检测丙二醛（MDA）的生成量和琼脂糖蛋白电泳检测蛋白相对电泳率（REM）。在MPO-H2O2体系中加入不同浓度的阿司匹林（1、5、10mmol/1）与LDL共孵育后,TBA法检测MDA的生成量和琼脂糖蛋白电泳检测蛋白相对电泳率。MPO途径氧化生成的氧化型低密度脂蛋白（oxidized low densitylipoprotein,ox-LDL）与THP-1单核巨噬细胞共同培养24小时后,油红O染色法检测细胞的形态学,液相色谱一质谱联用法检测细胞内胆固醇含量。结果:1.不同浓度的MPO与LDL孵育后,与对照组（单纯LDL）比较,MDA的生成量和蛋白相对电泳率（REM）差异均无统计学意义（P＞0.05）;2.不同浓度MPO浓度加入H2O2后与LDL共孵育,与对照组比较,MDA生成量和REM均有明显的增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;3.MPO-H2O2反应体系中加入不同浓度的阿司匹林（1、5、10mmol/1）后与LDL共孵育,在阿司匹林浓度为1mmol/L,与对照组比较,MDA的生成量和REM差异均无明显统计学意义（P＞0.05）;阿司匹林浓度在5mmo/l、10mmol/L,与对照组比较,MDA的生成量和REM均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;4.MPO途径氧化生成的ox-LDL与THP-1单核巨噬细胞共培养24小时后,油红O染色形态学观察;实验组巨噬细胞内可见大量的红色脂质颗粒,正常对照组几乎没有红色的脂质颗粒。液相色谱—质谱联用法检测,总胆固醇（TC）,游离胆固醇（FC）,实验组细胞检测CE/TC=52.70%（＞50%）,对照组CE/TC=35.7%（＜50%）。结论:1.MPO可能通过H2O2途径介导LDL氧化并诱导THP-1单核巨噬细胞泡沫化。2.5可司匹林可以抑制MPO-H2O2途径介导的LDL氧化。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要药物
• 1.3 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 试剂的配制
• 2.2 低密度脂蛋白（LDL）的氧化
• 2.2.1 LDL的制备与保存
• 2.2.2 ox-LDL的鉴定与氧化程度的检测
• 2.2.3 MPO对LDL的直接作用
• 2O₂体系对LDL的作用'>2.2.4 MPO-H₂O₂体系对LDL的作用
• 2O₂体系对LDL的氧化'>2.2.5 阿司匹林干预MPO-H₂O₂体系对LDL的氧化
• 2.3 MPO途径氧化形成的ox-LDL对THP-1单核巨噬细胞泡沫细胞的影响
• 2.3.1 ox-LDL的制备与提纯
• 2.3.2 THP-1单核细胞的培养和诱导分化
• 2.3.3 泡沫细胞的鉴定
• 2.4 统计学分析
• 第三章 结果
• 3 结果
• 3.1 MPO对LDL的直接作用
• 2O₂体系对LDL的作用'>3.2 MPO-H₂O₂体系对LDL的作用
• 2O₂体系氧化LDL的影响'>3.3 阿司匹林对MPO-H₂O₂体系氧化LDL的影响
• 3.4 泡沫细胞的鉴定
• 3.4.1 泡沫细胞形态学改变
• 3.4.2 液相色谱-质谱联用法测定检测细胞内的胆固醇含量
• 第四章 讨论
• 2O₂介导LDL的氧化'>1.MPO通过H₂O₂介导LDL的氧化
• 2.非甾体类药物对MPO的干预研究
• 3.MPO介导产生的ox-LDL致THP-1细胞泡沫化
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的主要研究成果