健脾益肾方治疗慢性肾功能衰竭肾纤维化实验和临床研究

论文摘要

目的:1、了解中医药治疗慢性肾功能衰竭（CRF）的研究进展;2、探讨健脾益肾方治疗CRF及其抗肾纤维化的作用机制,为临床应用提供实验依据;3、观察健脾益肾方治疗CRF患者临床疗效的同时,重点观察其抗肾纤维化的疗效。方法:1、文献研究:通过查阅大量古代和现代文献,总结CRF的中医病因病机、辨证论治的研究现状。2、实验研究:将wistar雄性大鼠随机分为正常对照组（N组）、模型组（M组）、低剂量治疗组（L组）、高剂量治疗组（H组）,除N组外均行5/6肾切除手术制作CRF动物模型。于造模后一周开始干预,N组、M组每天生理盐水lml灌胃;L组每天健脾益肾方浓缩液lml灌胃;H组每天健脾益肾方浓缩液4ml灌胃。干预8周后取24h尿液、血清及肾组织标本,全自动生化分析仪检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）;RT-PCR法检测肾组织血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（Lox-1）mRNA、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA的表达;免疫组织化学方法检测肾组织TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）的表达;ELISA法检测尿TGF-β1。3、临床研究:选取CRF代偿及失代偿期病人80例,随机分为治疗组42例、对照组38例。两组均给予抗感染,纠正水、电解质、酸碱失调,控制血压,严格控制饮食,优质低蛋白、低磷饮食,蛋白质摄入控制在0.6g/（kg·d）,保证能量的供给等。治疗组用中药健脾益肾方每日一剂,分两次口服;对照组仅口服贝那普利10mg/次,1次/天。8周后观察患者主要症状积分、肾功能及尿TGF-β1变化情况。结果:1、文献研究:CRF的病因复杂,多属本虚标实,正虚包括气、血、阴、阳、脏腑之虚损,其中以脾肾虚衰为主,邪实包括湿浊、瘀血和水毒,早期多表现为脾肾阳虚,以正虚为主。后期虚实错杂,肾阳虚衰、浊邪壅盛,以邪实较为突出。正虚为本,邪实为标,虚实寒热之间呈动态变化,病位以脾肾两脏为主。2、实验研究:（1）肾功能检测:干预8周后M组、L组、H组大鼠血BUN、Scr均明显升高,较N组显著增高（P＜0.01）;M组BUN、Scr升高较L组、H组明显,相比差异有显著性（BUN:M组-L组、M组-H组P＜0.01;Scr:M组-L组P＜0.05,M组-H组P＜0.01）;L组与H组之间BUN、Scr变化差异无显著性（P＞0.05）。（2）RT-PCR检测:各组大鼠肾脏均有Lox-1 mRNA表达,N组有较弱表达,M组、L组及H组大鼠肾组织表达较N组均明显增加（M组及L组-N组:P＜0.01,H组-N组:P＜0.05）:L组及H组表达较M组明显减少（P＜0.01）;H组表达较L组均明显减少（P＜0.05）。各组大鼠肾脏均有TGF-β1mRNA表达,N组有较弱表达,M组、L组大鼠肾组织表达较N组明显增加（P＜0.01）,H组表达较N组增加差异无显著性（P＞0.05）;L组及H组表达较M组明显减少（P＜0.01）;H组表达较L组均明显减少（P＜0.01）。（3）免疫组织化学检测:①TGF—β1表达:N组肾小球内皮细胞、毛细血管内皮细胞及肾小管上皮细胞均有微弱表达;M组上述部位高表达,与N组相比差异有显著性（P＜0.01）;L组及H组上述部位中等强度表达,表达增多与N组相比有统计学意义（P＜0.01）,与M组相比表达有显著降低（P＜0.01）;H组表达较L组显著降低（P＜0.05）。②α—SMA表达:N组肾间质、肾小管周围、肾小管、肾小球无表达,肾间质血管、入球小动脉血管壁阳性;M组肾间质及肾小管上皮细胞强阳性表达,肾小球内亦有表达,与N组相比表达显著增强（P＜0.01）;L组及H组肾间质及肾小管上皮细胞中等强度表达,表达增多与N组相比差异有显著性（P＜0.01）,与M组相比表达显著降低（P＜0.01）;H组与L组相比表达显著降低（P＜0.05）。③FN表达:N组肾小管间质区、上皮细胞基底膜、血管平滑肌区轻微表达;M组肾小管间质及小管均有强表达,小球系膜区有表达,与N组相比差异有显著性（P＜0.01）:L组及H组肾小管间质及小管中等强度表达,与N组相比表达显著增多（P＜0.01）,与M组相比表达显著降低（P＜0.01）;H组与L组相比表达减少（P＜0.05）。（4）尿TGF—β1ELISA检测:M组、L组、H组较N组尿TGF—β1浓度明显升高,差异有显著性（P＜0.01）;L组、H组尿TGF-β1浓度低于M组,组间相比差异有显著性（P＜0.01）;H组尿TGF-β1浓度较L组稍低,但差异无统计学意义。3、临床研究:治疗前两组症状积分无明显差异（P＞0.05）;治疗后治疗组症状明显减轻,与治疗前相比差异有显著性（P＜0.01）;治疗后对照组症状减轻,与治疗前相比差异有统计学意义（P＜0.05）;治疗后两组相比,治疗组症状较对照组明显减轻,差异有显著性（P＜0.01）。治疗前两组血清BUN、Scr水平均无差异;治疗后,治疗组患者血清BUN、Scr水平明显下降,其差异有显著性意义（P＜0.01）;对照组患者血清BUN、Scr明显下降,其差异有显著性意义（P＜0.05）。治疗组较对照组尿TGF-β1浓度明显降低,差异有显著性（P＜0.01）。结论:1、文献研究表明,中药在治疗CRF中有独特的作用,尤其对早中期肾功能不全患者确有其独特优势;中药是以天然植物为主,对人体毒副作用较小;并且中医治疗之长还在于整体调节,提高生活质量,延缓病情进展,延长者寿命。2、动物实验研究表明,健脾益肾方可以降低CRF大鼠血清BUN和Cr,抑制肾脏组织Lox-1、TGF-β1、α-SMA及FN的表达,表明健脾益肾方是治疗CRF的有效方剂,其机理可能与抑制大鼠肾组织内TGF-β1等细胞因子的表达,减少α-SMA和FN的产生,从而抑制参与肾纤维化的细胞增殖和转分化,延缓肾纤维化的进展,达到治疗和延缓CRF进展的目的。3、临床研究表明,健脾益肾方治疗CRF能够明显改善患者的临床症状,降低患者血清Cr和BUN水平,使患者肾功能趋于好转;明显降低尿TGF-β1的排泄,延缓肾纤维化的发展,从而延缓CRF的进展,是一种临床防治CRF有效的中药方,值得进一步的研究开发和临床推广。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 文献研究
• 慢性肾功能衰竭的中医药治疗
• 一、中医病名
• 二、病因病机
• 三、辨证论治
• 四、评价与展望
• 第二部分 实验研究
• 健脾益肾方治疗慢性肾功能衰竭大鼠肾纤维化实验研究
• 一、材料和方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 第三部分 临床研究
• 健脾益肾方治疗脾肾气（阳）虚型慢性肾功能衰竭临床疗效观察
• 一、一般资料
• 二、研究方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 结语
• 一、结论
• 二、创新点
• 参考文献
• 附录
• 附录一、缩略语表
• 附录二、大鼠肾脏组织病理及免疫组化典型彩图
• 附录三、慢性肾功能衰竭症状分级量化表
• 发表论文情况
• 致谢