用生物发光免疫技术检测肝肿瘤标志物AFP在肝癌早期诊断中的研究

论文摘要

原发性肝癌是亚洲与非洲地区最常见的高发恶性肿瘤,发病率与死亡率都很高,防治肝癌成为肿瘤研究的重要课题。胎儿甲种球蛋白(AFP)是原发性肝癌的相关抗原,由肝癌细胞分泌入血并能反映肿瘤存在的肿瘤特异性,多年来一直作为诊断原发性肝细胞癌的重要参考依据,并已成为国际公认的原发性肝癌早期诊断最好的理想指标。检测AFP 的技术目前以放射免疫技术灵敏性最高,但由于其同位素放射污染和仪器昂贵等缺点,难以推广使用。本研究建立了敏感性可与放射免疫法相媲美的生物发光免疫分析技术,即利用我国海洋明亮发光杆菌提取荧光素酶,并固相化,测定AFP 的原发性肝癌蛋白标志物。502可作为实验室对原发性肝细胞癌早期诊断的手段,以期达到早期诊断、早期治疗、降低死亡率、提高存活率的目的,为肝癌的早期诊断提供了新途径。此种生物发光检测诊断技术,是一种新的AFP 测定方法,具有灵敏度高,特异性强,假阳性率低,检出率高,设备便宜,操作简捷,无污染,易推广应用等优点。尤其适用于对小肝癌持续存在的低浓度AFP 检测。

论文目录

• 第一章 引言
• 1.1 概述
• 1.1.1 肝癌早期诊断的可能性
• 1.1.2 AFP 的常用检测方法及诊断意义
• 1.1.3 常用 AFP 检测方法应用于诊断的限制性
• 1.1.4 AFP 检测方法的进展
• 1.1.5 其他肝癌标志物
• 1.1.5.1 AFP 异质体
• 1.1.5.2 异常凝血酶原
• 1.1.5.3 端粒酶
• 1.1.5.4 AFPmRNA
• 1.2 肝肿瘤标志物 AFP 的检测
• 1.2.1 肝肿瘤标志物 AFP 与生物发光免疫技术
• 1.2.2 AFP 的代谢
• 1.2.3 生物发光的研究
• 1.2.4 AFP 与生物发光免疫技术
• 1.3 肝肿瘤标志物与肝癌早期诊断研究近况
• 1.3.1 肝肿瘤标志物研究近况
• 1.3.2 其他瘤标志物研究近况
• 1.3.3 肝肿瘤标志物联合检测与肝癌早期诊断近况研究
• 参考文献
• 第二章 实验仪器与试剂
• 2.1 实验仪器
• 2.2 试剂与溶液的配制
• 第三章 实验方法
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 菌种
• 3.1.1 血清样品
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 荧光素酶的提取纯化
• 3.2.1.1 荧光素酶的提取
• 3.2.1.2 荧光素酶的纯化
• 3.2.1.3 荧光素酶的纯度检测
• 3.2.1.4 荧光素酶的亚基拆分和重聚与生物发光活性的测定
• 3.2.1.5 荧光素酶的分子量测定
• 3.2.1.6 荧光素酶的固相化
• 3.2.1.7 荧光素酶发光活性的测定
• 3.2.1.8 G6PDH 标记羊抗鼠抗体
• 3.2.1.9 G6PDH 标记抗 AFP 抗体的活性测定
• 3.2.2 影响因素的实验
• 3.2.2.1 溴化氰对荧光素酶固相化的影响
• 3.2.2.2 时间和温度对荧光素酶固相化的影响
• 3.2.2.3 NADH 对荧光素酶固相化的影响
• 3.2.2.4 BSA 对荧光固相化酶的影响
• 3.2.2.5 黄素还原酶对荧光素酶发光活性的作用
• 3.2.2.6 MBS 对 G6PDh 标记抗AFP 抗体中的作用
• 3.2.3 生物发光免疫分析测定样品中 AFP 含量
• 第四章 荧光素酶的提取、纯化和发光活性的鉴定
• 4.1 明亮发光杆菌502 的培养
• 4.2 荧光素酶的提取、纯化和发光活性的鉴定
• 4.2.1 荧光素酶的提取、纯化
• 4.2.2 荧光素酶发光活性的鉴定
• 4.3 荧光素酶的分子量测定
• 4.4 荧光素酶的纯化与发光活性
• 第五章 影响荧光素酶固相化的因素
• 5.1 溴化氰对荧光素酶固相化的影响
• 5.2 时间和温度对荧光素酶固相化的影响
• 5.3 NADH 对荧光素酶固相化的影响
• 5.4 BSA 对荧光素酶固相化的影响
• 5.5 黄素还原酶对荧光素酶发光活性的作用
• 5.6 G6PDH标记抗人AFP抗体的生物发光免疫活性的测定
• 5.6.1 MBS 在G6PDH 标记抗AFP 抗体中的作用
• 5.6.2 G6PDH 标记抗 AFP 抗体活性的测定
• 5.7 小结
• 5.7.1 荧光素酶生物发光活性条件的选择
• 5.7.2 MBS 和 G6PDH 标记反应体系与生物发光反应的关系
• 5.7.3 生物发光与酶标免疫反应的关系
• 第六章 生物发光免疫技术检测结果
• 6.1 AFP 标准品生物发光免疫活性测定及结果
• 6.2 检测各类患者血清样品中的 AFP 含量
• 6.3 生物发光免疫技术测定AFP 的检出率
• 6.4 生物发光免疫技术检测AFP 正常值的确定
• 第七章 利用生物发光免疫技术检测 AFP 在肝癌早期诊断中的研究
• 7.1 生物发光免疫技术检测 AFP 的肝癌早期诊断临床意义
• 7.2 应用与展望
• 7.3 生物发光免疫技术检测AFP 在肝癌早期诊断中的研究
• 参考文献
• 论文摘要
• Abstract
• 致 谢