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氯化锂—匹罗卡品致痫大鼠海马CA3区神经元AIS的可塑性研究

2020-12-10阅读(825)

氯化锂—匹罗卡品致痫大鼠海马CA3区神经元AIS的可塑性研究

论文摘要

目的研究氯化锂-匹罗卡品癫痫模型SD大鼠海马CA3区神经元轴突起始段（axon initial segment, AIS） Nav1.6和ankyrin G的表达分布及其变化规律,探讨AIS的可塑性变化在癫痫发病中的作用。方法6-8周龄健康雄性SD大鼠随机分为模型组（N=76只）和对照组（N=36只）,模型组大鼠予腹腔注射氯化锂-匹罗卡品致痫,对照组大鼠予生理盐水假处理。分别于癫痫持续状态（status epilepticus, SE）诱导成功后24小时（急性期）、7天（静止期）和60天（慢性期）三个时间点取模型组和对照组大鼠制备海马冰冻切片及提取海马CA3区总蛋白和mRNA。采用免疫荧光双标染色、Western blot及Real-Time PCR方法检测Nav,1.6和ankyrin G在大鼠海马CA3区神经元的共定位及其表达量的变化。结果免疫荧光染色显示,Nav,1.6和ankyrin G在海马CA3区的锥体神经元AIS区共表达,而在胞膜区仅有较低密度的Nav,1.6表达；实验组和对照组AIS的染色模式在SE后各期均一致。Western blot检测显示Nav,1.6在急性期和慢性期的表达量较对照组均显著增高（P<0.01）,而ankyrin G （480/270kDa）的表达在急性期较对照组降低（P<0.05）,慢性期较对照组增高（P<0.05）; Real-Time PCR检测显示,Nav1.6和ankyrin G mRNA的表达在急性期和慢性期较对照组均显著增高（P<0.01）；在静止期,Nav,1.6和ankyrin G蛋白及其mRNA的表达与对照组比较均无显著差异（P>0.05）。结论氯化锂-匹罗卡品诱导SD大鼠癫痫持续状态后,海马CA3区神经元AIS发生了结构和功能重塑,并可能参与了慢性自发性癫痫的形成。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 目录
  • 縮略词表
  • 第一章 前言
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 动物及主要试剂
  • 2.2 主要仪器
  • 2.3 实验方法
  • 2.3.1 动物分组与癫痫模型制备
  • 2.3.2 实验时间点的选择
  • 2.3.3 冰冻切片的制备
  • 2.3.4 海马组织的分离与保存
  • 2.3.5 免疫荧光双标
  • 2.3.6 Western Blot检测
  • 2.3.7 Real-Time PCR检测
  • 2.4 数据统计分析
  • 第三章 实验结果
  • 3.1 氯化锂-匹罗卡品癫痫动物模型
  • 3.1.1 行为学观察
  • 3.1.2 造模数据统计
  • v1.6和ankyrin G在海马CA3区的共定位表达'>3.2 Nav1.6和ankyrin G在海马CA3区的共定位表达
  • v1.6和ankyrin G蛋白的表达'>3.3 海马CA3区锥体神经元Nav1.6和ankyrin G蛋白的表达
  • v1.6和ankyrin G mRNA的表达'>3.4 海马CA3区组织Nav1.6和ankyrin G mRNA的表达
  • 3.4.1 RNA的完整性检测结果
  • 3.4.2 熔解曲线和扩增曲线
  • 3.4.3 SCN8A和ANK-3 mRNA的表达水平
  • 第四章 讨论
  • 4.1 氯化锂-匹罗卡品癫痫模型的建立
  • v1.6和ankyrin G的共表达'>4.2 神经元AIS区Nav1.6和ankyrin G的共表达
  • v1.6蛋白及其mRNA的表达变化'>4.3 海马CA3区Nav1.6蛋白及其mRNA的表达变化
  • 4.4 海马CA3区ankyrin G蛋白及其mRNA的表达变化
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 参考文献
  • 致谢
  • 在读期间完成的论文

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