2型糖尿病大鼠血清P-选择素的动态变化及意义

论文摘要

目的:糖尿病血管病变是导致糖尿病患者致残和死亡的主要原因。因此,深入研究糖尿病血管病变以明确发病机制,开展有效的预防,治疗,以延缓糖尿病血管病变的发生,发展是目前糖尿病治疗领域中的重点。P-选择素是细胞黏附分子选择素家族的重要成员之一,是血小板活化过程中由血小板内α-颗粒释放暴露于血小板浆膜表面的一种膜抗原,部分脱落进入血浆。血浆中P-选择素含量,是反映体内血小板活化程度的特异标志.所以本研究的目的是通过建立2型糖尿病大鼠模型,检测其成膜后0、4、8、12、16周P-选择素的浓度,以了解糖尿病大鼠随病程进展P-选择素的变化趋势,并进一步探讨糖尿病大鼠血清P-选择素与血小板活化及血栓形成之间的关系,为临床预防,早期发现糖尿病患者血栓病变提供客观依据。方法:健康7周龄清洁级近交系Wistar大鼠120只（河北医科大学试验动物中心提供）,体重180-220g,雌雄各半,随机分为两组:正常组（ control group ,CON）50只,雌雄各半,作为对照;实验组（trial group ,TRI）70只,雌雄各半。正常组动物喂养普通饲料:蛋白质占23%,碳水化合物占50%,脂肪占5%;实验组动物喂养高脂饲料:在10000g普通饲料中加入150g食盐、50g白糖、2000g猪油、400g麻油、2000g花生、900g鸡蛋,其碳水化合物48%,脂肪22%,蛋白质20%。2月后实验组大鼠腹腔注射30mg/kg链脲佐菌素（STZ）（以PH4.4的0.1mol/l柠檬酸钠缓冲液配制成1%浓度）,正常组大鼠腹腔注射同等量的柠檬酸钠缓冲液。一周后给所有动物做口服葡萄糖耐量试验（大鼠禁食12h后尾静脉取血测空腹血糖,然后按2g/kg体重灌胃50%葡萄糖溶液, 2h后尾静脉取血测2h血糖）,空腹血糖≥7.0mmol/l,糖负荷后2小时血糖≥11.1mmol/l者为造模成功。从造模成功者中选取血糖较高的大鼠50只（雌雄各半）纳入正式试验,做为糖尿病组（diabetes group, DIA）。采用随机数字表随机将正常组和糖尿病组各分为0周、4周、8周、12周、16周5组,每组10只,雌雄各半,分别于以上时段空腹取血测定观测值。正常组一直喂普通饲料,糖尿病组继续喂高脂饲料,以防血糖回落,每2周测体重和空腹血糖（均为禁食10-12小时,尾静脉取血）,空腹血糖<7.0mmol/l为剔除条件。于试验第0、4、8、12、16周末禁食10-12小时,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,下腔静脉取血5-7ml注入普通试管,室温下静置1小时,血液自然凝固,3000转/分离心10分钟,取上清夜,-80℃冰箱保存。待标本收集齐全后同批采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血脂及可溶性P-选择素（sP-selectin）浓度。所用数据输入SAS统计软件包进行统计,计量资料用均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析和Q检验,两者之间相关性关系采用直线相关分析。P<0.05为统计学有显著性差异。结果:1成模前正常组大鼠体重稳定增长,血糖值均正常;实验组大鼠体重增加较正常组快,成模前血糖亦在正常范围。（见附表1）2正式试验后正常组大鼠随年龄增长,血糖值稳定,均在正常范围,各时间段之间无明显差别,高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、P-选择素浓度均无明显变化;糖尿病组大鼠随着病情的进展血糖值处于较高水平,无明显增高或降低,各时间段之间无明显差别（P>0.05）;糖尿病组大鼠成模后体重增加缓慢甚至降低,但与正常组同时段比无明显差异。3糖尿病组大鼠在成模0周,4周时P-选择素水平已有升高趋势,但无统计学差异。8周,12周,22周时P-选择素水平相对于对照组明显升高,P<0.05。各时间段相比随病程延长浓度逐渐增高。（见附表2）4随着糖尿病病情进展,糖尿病组大鼠低密度脂蛋白胆固醇随病程延长逐渐增高,高密度脂蛋白胆固醇随病程延长逐渐降低,且有统计学差异。（P<0.05）5糖尿病组大鼠低密度脂蛋白胆固醇与可溶性P-选择素浓度呈正相关,相关系数为（r=0.642）（见附图6）;高密度脂蛋白胆固醇与可溶性P-选择素浓度成负相关（r=–0.658）。（见附图7）结论:本研究结果显示2型糖尿病大鼠血清P-选择素的浓度随着病程的进展逐渐增加。8周以后同对照组相比有统计学意义。同时高密度脂蛋白,低密度脂蛋白随病情进展呈现降低和升高趋势. P-选择素升高的原因可能是在糖尿病的病理反应中已有凝血因子或凝血物质浓度异常,血小板大量活化,P-选择素大量表达释放。由于P-选择素介导了活化的血小板或受损的内皮细胞与中性粒细胞,单核细胞的粘附,作为血栓形成前的一个因素。因此,在早期对糖尿病病人进行P-选择素的监测,对预防糖尿病血栓并发症的发生提供了有利的帮助。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 2 型糖尿病大鼠血清 P-选择素的动态变化及意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 血小板功能亢进与 2 型糖尿病血管并发症关系
• 致谢
• 个人简历