卵巢上皮性肿瘤中B7-H4和CD4+CD25+/CD8+T淋巴细胞检测及其临床病理意义的研究

论文摘要

目的:1 B7-H4是最近发现的免疫特异性协同刺激因子B7家族新成员,在抗体介导的特异性T细胞免疫反应中具有抑制作用。本实验检测B7-H4在卵巢上皮性肿瘤中的表达情况,结合临床病理资料探讨其与卵巢癌发生发展及预后的关系。同时检测三种卵巢癌细胞株SKOV3、3AO、A2780中B7-H4基因转录及表达情况,为进一步研究B7-H4基因的生物学特性提供细胞载体。2 CD4+CD25+T细胞（Regulatory T cells,Tregs）存在于多种恶性肿瘤渗出液及患者血液中,与肿瘤相关免疫抑制密切相关。CD8+T细胞是一种肿瘤浸润淋巴细胞（Tumorinfiltrating lymphocyte,TIL）具有高效、特异、副作用小等优点的抗肿瘤免疫活性细胞。本实验通过检测卵巢浆液性癌中两种T细胞数目,结合B7-H4表达检测,探索B7-H4在卵巢癌中的免疫作用及两种T细胞浸润与卵巢浆液性癌预后的关系。方法:实验一分别采用RT-PCR及免疫组织化学的方法检测卵巢上皮性肿瘤组织中B7-H4基因mRNA及蛋白的表达情况。标本均来自山东大学齐鲁医院妇产科2003年1月至2007年7月接受手术治疗的卵巢肿瘤患者,其中原发性卵巢上皮性癌65例（术前未经放疗、化疗）,卵巢交界性肿瘤18例,卵巢良性上皮性肿瘤5例。所选用的组织标本均经HE染色病理确诊。相关病例随访后结合B7-H4基因表达情况进分析。结果使用SPSS13.0软件包进行统计学处理。实验二另取上述标本中浆液性癌患者标本,采用免疫荧光双标及免疫组织化学单标的方法检测相对应组织中CD4+CD25+T细胞和CD8+T细胞的数目,并结合临床病理资料及B7-H4基因检测结果,分析B7-H4表达与两种T细胞浸润的关系及两种T细胞浸润与卵巢癌预后的关系。结果使用SPSS13.0软件包进行统计学处理。结果:实验一B7-H4基因在卵巢上皮性肿瘤组织中的mRNA表达经RT-PCR扩增后大小为184bp。95例卵巢上皮性肿瘤中均有B7-H4 mRNA的表达。B7-H4蛋白在良性卵巢上皮性肿瘤、交界性卵巢上皮性肿瘤、卵巢上皮性癌中的表达阳性比例分别为4/12、11/18、59/65,恶性标本阳性率明显高于非恶性标本,差异有显著性（P＜0.05）;58例卵巢上皮性癌标本中浆液性癌、内膜样癌、透明细胞癌、黏液性癌的B7-H4蛋白阳性比例分别为41/41、5/5、2/2、4/10,前三种病理类型B7-H4蛋白阳性率明显高于最后一种,差异有显著性（P＜0.05）;41例卵巢浆液性癌标本中B7-H4蛋白阳性细胞比例在＜10%,＞10%-50%,＞50-80%,＞80-100%四组中的分布差异无显著性（P＞0.05）,但其蛋白表达与临床分期及病理分级有关（P＜0.05）,而与患者年龄、腹水细胞学、淋巴结转移、生存期均无关（P＞0.05）。三种卵巢癌细胞株中B7-H4 mRNA及蛋白表达均为阴性。实验二结果显示CD4+CD25+T淋巴细胞为19.95±11.50个/10高倍镜视野（High power Field,HPF）,CD8+T淋巴细胞为43.46±16.69个/10HPF。Mann-Whitney检验发现B7-H4高表达导致Tregs数目增多（P＜0.05）,而导致CD8+T淋巴细胞数目减少（P＜0.05）。生存分析发现高CD4+CD25+T细胞组卵巢浆液性癌患者总生存期均较低CD4+CD25+T细胞组缩短,差异具有显著性（P＜0.05）;而高CD8+T细胞组卵巢浆液性癌患者总生存期与低CD8+T细胞组相比延长,且差异具有显著性（P＜0.05）,此外两种T细胞数目与患者年龄、病理分级、临床分期、腹水细胞学及淋巴结转移均无关（P＞0.05）。结论:1.B7-H4蛋白在卵巢上皮性癌中高表达,综合其表达与临床分级分期的关系,提示B7-H4可能与肿瘤发生发展有关,可为卵巢上皮性癌的诊断及治疗提供靶位点。2.B7-H4在三种卵巢癌细胞株中的阴性表达,为进一步研究B7-H4基因提供阴性细胞载体。3.B7-H4基因在卵巢癌肿瘤免疫反应中具有抑制作用。4.癌灶CD4+CD25+和CD8+T细胞亚群与卵巢浆液性癌患者生存期相关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 实验一:检测B7-H4基因在卵巢上皮性肿瘤组织的表达及其意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• +CD25⁺和CD8⁺T细胞亚群与患者生存期及B7-H4表达的相关分析'>实验二:卵巢浆液性癌灶CD4⁺CD25⁺和CD8⁺T细胞亚群与患者生存期及B7-H4表达的相关分析
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间完成的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表