海地瓜（Acaudina molpadioides）活性脂质的制备研究及抗肿瘤活性初探

论文摘要

海地瓜（Acaudina molpadioides）属海参纲（Holothuroidea）芋参目（Molpadida）尻参科（Caudinidae）,盛产于亚热带沙质海区,我国山东到海南岛的海域均有分布,是一种资源丰富的低值海参。鞘脂类和甾醇是海参中重要的活性脂质成分,具有多种生物活性功能,如抑制肿瘤、调节免疫活性、抗病毒、抗菌以及抗炎等多种生理功能。目前有关海参活性脂质的研究主要集中在刺参科的高值海参品种,国内外在海地瓜等低值海参活性脂质方面的研究较少。本论文以海地瓜为原料,对海地瓜的低极性活性脂质进行了分离纯化和结构鉴定,并以海地瓜脂质粗提物为原料水解制备了海地瓜长链碱化合物,在此基础上初步探讨了海地瓜低极性活性脂质和长链碱的抗S-180细胞活性,为开发低值海参新的食（药）用功效提供了理论基础和科学依据。主要研究内容和结果如下:1.采用有机溶剂提取、多步萃取和反复的正反相硅胶柱层析,对海地瓜的低极性脂质进行了分离纯化,并鉴定了纯化出的5种化合物的结构,分别为:1种神经酰胺类,3种脑苷脂类和1种甾醇类化合物。其中甾醇类:3β-O-硫酸酯-麦角甾-7,9（11）,24（28）-三烯-硫酸钠盐为新化合物。以上化合物均为首次从该品种中分离得到。2.以海地瓜脂质粗提物为原料水解制备了海地瓜长链碱,并应用高速逆流色谱（HSCCC）技术成功优化了海地瓜长链碱化合物的纯化过程。海地瓜长链碱的HSCCC法纯化溶剂体系为正己烷-甲醇-水（1:2:1, V/V）,得到的海地瓜总长链碱纯度在95%以上,与传统的硅胶柱层析方法相比,应用HSCCC法纯化长链碱溶剂消耗减少70%、纯化时间减少88%、样品得率提高了3.5倍,具有快捷高效等特点。3.对分离得到的海地瓜活性脂质和长链碱化合物进行了抗S-180肿瘤细胞活性研究。结果表明:海地瓜的5种活性脂质脂质体和水解获得的长链碱均具有显著抑制S-180细胞增殖的作用,且呈现明显的时间和剂量效应关系。其中海地瓜鞘脂的抗S-180细胞活性具有一定的构效关系。长链碱基团上多羟基结构的存在能够显著提高鞘脂的抗S-180肿瘤细胞活性;β-葡萄糖的存在也会增强鞘脂类抑制S-180细胞增殖的活性。水解获得的海地瓜长链碱化合物较天然存在的鞘脂类化合物的抗S-180肿瘤活性更强。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 0 前言
• 0.1 海参资源概述
• 0.2 海地瓜概述
• 0.3 海参的药食同源价值
• 0.4 海参脂质
• 0.4.1 鞘脂类概述
• 0.4.1.1 鞘脂类简介
• 0.4.1.2 长链碱
• 0.4.1.3 神经酰胺
• 0.4.1.4 脑苷脂
• 0.4.2 甾醇
• 0.5 鞘脂类的分离纯化和结构鉴定
• 0.5.1 鞘脂类的提取
• 0.5.2 鞘脂类的分离纯化
• 0.5.3 鞘脂类的结构鉴定
• 0.6 高速逆流色谱法概述
• 0.6.1 高速逆流色谱法原理
• 0.6.2 高速逆流色谱仪
• 0.6.3 高速逆流色谱法溶剂系统的选择
• 0.6.4 高速逆流色谱的应用
• 0.7 本研究的目的意义
• 1 海地瓜低极性活性脂质的分离纯化及结构鉴定
• 1.1 实验材料和仪器
• 1.1.1 原料
• 1.1.2 主要实验试剂
• 1.1.3 色谱柱及填料
• 1.1.4 主要仪器设备
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 海地瓜低极性脂质的分离纯化
• 1.2.2 结构鉴定
• 1.3 结果与讨论
• 1.3.1 海地瓜神经酰胺的结构解析
• 1.3.2 海地瓜脑苷脂的结构解析
• 1.3.3 海地瓜甾醇硫酸盐的结构解析
• 1.3.4 讨论
• 1.4 本章小结
• 2 海地瓜长链碱的水解制备
• 2.1 海地瓜长链碱的水解制备
• 2.1.1 实验材料和仪器
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 结果与讨论
• 2.2 高速逆流色谱法制备海地瓜长链碱
• 2.2.1 实验材料和仪器
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.3 实验结果
• 2.2.4 讨论
• 2.3 本章小结
• 3 海地瓜低极性活性脂质及长链碱的抗 S-180 活性初探
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 受试样品
• 3.1.2 肿瘤细胞株
• 3.1.3 试剂和药品
• 3.1.4 仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 海地瓜低极性活性脂质脂质体的制备
• 3.2.2 海地瓜长链碱溶液的制备
• 3.2.3 MTT 法检测样品对S-180 细胞增殖的影响
• 3.2.4 统计学处理
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 海地瓜低极性活性脂质对 S-180 细胞增殖的影响
• 3.3.2 海地瓜长链碱对 S-180 细胞增殖的影响
• 3.4 讨论
• 3.5 本章小结
• 4 结论
• 4.1 总结
• 4.2 本论文主要创新点
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 发表的学术论文和研究成果