猪、犬转移因子对犬体液免疫的影响

论文摘要

转移因子(transfer factor, TF)是从淋巴细胞中提取的一类小分子物质,化学本质是小肽与寡聚核苷酸复合物。TF能够将供体的细胞免疫功能转移给受体,尤其是非特异性TF能够提高受体天然免疫和特异性免疫功能的特性使其在人类和多种动物疾病防治中获得普遍应用。犬细小病毒病是由犬细小病毒感染引起的一种急性传染病,以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征,并可引起犬急性心肌炎。症状与猫泛白细胞减少症相似,是危害我国养犬业最为严重的传染病之一。前期试验中,猪、犬TF对犬细胞免疫的增强作用已得到证实。为了进一步研究猪、犬TF能否作为疫苗稀释剂,以期最终简化免疫方法和程序,本试验在细胞水平上对猪、犬TF对犬细小病毒体外增殖的影响进行了初步研究。从TF与疫苗联合使用和将TF作为疫苗稀释剂两个方面研究了猪、犬TF对犬体液免疫的影响。结果如下:1犬细小病毒的增殖与检测对实验室保存的犬细小病毒在MDCK上进行增殖,为后续试验提供抗原。用血凝实验检测犬细小病毒,并对检测条件进行了优化。50 mL,1 %醛化红细胞,以0.01 M PH6.8的PBS为稀释液,4℃反应60 min是检测犬细小病毒的最佳条件。疫苗进行稀释后,其血凝效价为26,按照增毒步骤进行操作后,细胞培养物的血凝效价为211,证明了疫苗中含有犬细小病毒弱毒。2不同剂量TF对犬细小病毒增殖的影响在培养的MDCK中,单独加入不同剂量的猪、犬TF,均可引起MDCK出现细胞病变。细胞病变出现的时间,随着TF剂量的减少而推迟。猪TF对MDCK的破坏作用大于同等剂量下犬TF对MDCK的破坏。细胞吸附病毒后,加入TF,细胞病变出现的时间,远早于TF或犬细小病毒单独作用于MDCK上的时间,说明二者的共同作用加速了细胞病变的产生。不同剂量的猪、犬TF均可使疫苗中所含的犬细小病毒在MDCK上的增殖减弱,剂量越少影响越小,同等剂量下猪TF对其的影响比犬TF的大。3猪、犬TF对犬体液免疫的影响3 mL猪、犬TF与疫苗联合使用,每隔五天采血,检测犬细小病毒抗体,抗体效价没有明显的改变。3 mL猪、犬TF作为疫苗的稀释剂对犬进行免疫,抗体效价也没有明显的差异。说明3 mL猪、犬TF不论与疫苗联用,还是作为疫苗的稀释剂,均对犬的体液免疫没有明显的影响。本研究对猪、犬TF对犬体液免疫的影响进行了研究,结果显示TF可以作为疫苗稀释剂使用,但对犬的体液免疫没有明显的影响,其剂量还需要进一步的研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 第一章 免疫佐剂研究概况
• 1.1 免疫佐剂的类型
• 1.2 免疫佐剂的作用机理
• 1.3 部分类型免疫佐剂的研究概述
• 1.3.1 盐类佐剂
• 1.3.2 油乳佐剂
• 1.3.3 微生物及微生物来源的佐剂
• 1.3.3.1 卡介苗（BCG）
• 1.3.3.2 胞壁酰二肽（MDP）及其衍生物
• 1.3.3.3 细菌脂多糖（LPS）
• 1.3.3.4 CpG 免疫调节序列
• 1.3.4 脂质体作为佐剂
• 1.3.5 蜂胶的佐剂作用
• 1.3.6 细胞因子类免疫佐剂
• 1.3.6.1 γ-干扰素（IFN-γ）
• 1.3.6.2 白细胞介素2（IL-2）
• 1.3.7 植物来源的佐剂
• 1.3.8 微量元素、维生素佐剂
• 1.3.9 其他类型的免疫佐剂
• 1.4 佐剂研究发展趋势
• 第二章 转移因子的研究概况
• 2.1 转移因子的种类
• 2.2 TF 的理化特性
• 2.3 TF 的生物学特性
• 2.4 TF 的作用机制
• 2.4.1 传递细胞免疫信息、激活正常淋巴细胞和修复淋巴细胞膜受体
• 2.4.2 调节细胞免疫
• 2.4.3 抗放射、抗免疫抑制剂和提升白细胞作用
• 2.4.4 TF 诱导启动干扰素的作用
• 2.4.5 人工被动免疫作用
• 2.5 TF 的功能
• 2.5.1 增强细胞免疫功能
• 2.5.2 对体液免疫的影响
• 2.5.3 促进机体的生长发育
• 2.6 动物TF 在兽医领域的研究前景
• 试验研究
• 第三章 犬细小病毒的增殖和检测
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 试剂
• 3.1.1.2 仪器与设备
• 3.1.1.3 其他材料
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 常用液的配制
• 3.1.2.2 常用器械的清洗和消毒
• 3.1.2.3 MDCK 的培养
• 3.1.2.4 犬细小病毒的增殖
• 3.1.2.5 醛化红细胞的制备
• 3.1.2.6 犬细小病毒最佳检测条件的确定
• 3.1.2.7 犬细小病毒的检测
• 3.2 结果
• 3.2.1 MDCK 的培养
• 3.2.2 醛化红细胞的制备
• 3.2.3 最佳检测条件的确定
• 3.2.4 犬细小病毒的检测
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 猪、犬转移因子对犬细小病毒体外增殖的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.1.1 试剂
• 4.1.1.2 仪器与设备
• 4.1.2 方法
• 4.1.2.1 疫苗稀释
• 4.1.2.2 病毒增殖
• 4.1.2.3 猪TF 对犬细小病毒增殖的影响
• 4.1.2.4 犬TF 对犬细小病毒增殖的影响
• 4.2 结果
• 4.2.1 猪TF 对犬细小病毒增殖的影响
• 4.2.1.1 对细胞病变出现时间的影响
• 4.2.1.2 对细胞培养物血凝价的影响
• 4.2.2 犬TF 对犬细小病毒增殖的影响
• 4.2.2.1 对细胞病变出现时间的影响
• 4.2.2.2 对细胞培养物的血凝价的影响
• 4.3 讨论
• 4.3.1 对照组的设置
• 4.3.2 不同剂量TF 对MDCK 的影响
• 4.3.3 不同剂量TF 对犬细小病毒增殖的影响
• 4.4 小结
• 第五章 猪、犬转移因子对犬细小病毒疫苗免疫效果的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.1.1 试剂
• 5.1.1.2 仪器与设备
• 5.1.1.3 实验动物
• 5.1.2 方法
• 5.1.2.1 犬的饲养与管理
• 5.1.2.2 猪、犬TF 与疫苗联用
• 5.1.2.3 猪、犬TF 作为疫苗稀释剂
• 5.1.2.4 血清分离
• 5.1.2.5 CPV 抗体的检测
• 5.2 结果
• 5.2.1 猪、犬TF 与疫苗联合使用
• 5.2.2 猪、犬TF 作为疫苗稀释剂
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介