武汉汉族人群TLR4、RAGE基因多态性与糖尿病相关性研究及人体白色脂肪组织TLR4表达与肥胖相关性研究

论文摘要

第一部分武汉汉族人群TLR4、RAGE基因多态性与糖尿病相关性研究【目的】研究武汉汉族人群TLR4基因Asp299Gly、RAGE基因1704G/T, G82S单核苷酸多态性与2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus, T2DM）及其慢性并发症的关系。【方法】对506名T2DM病人,182名糖耐量正常（normal glucose tolerance, NGT）的个体,运用连接酶检测反应（ligase detection reaction,LDR）联合多聚酶链反应技术（polymerase chain reaction, PCR）检测TLR4基因Asp299Gly、RAGE基因1704G/T, G82S单核苷酸多态性,并分析它们与T2DM及其慢性并发症的关系。【结果】所有样本未发现TLR4基因Asp299Gly位点变异,均为AA野生基因型;在T2DM和NGT个体中,1704G/T、G82S基因型和等位基因型频率在T2DM和NGT个体中的分布无明显差异。在T2DM中,1704T等位基因者HOMA-?显著低于1704G等位基因者（1.68±0.43 VS 1.80±0.37,P =0.03）,而且,1704T等位基因者高血压的伴发率低于其他基因型（P =0.001）;82S等位基因者HOMA-?略低于G82等位基因者（1.70±0.4 VS 1.81±0.38,P =0.05）,在正常对照组中未发现这种差异。进一步研究发现82S等位基因者视网膜病变的发生率高于G82等位基因者（43.3% VS 23.8%,P < 0.001）,同时未见这两种基因多态性与其他慢性并发症相关。在T2DM中,糖尿病伴视网膜病变组G82S表现为G/A + AA基因型频率（60.6%）和A等位基因型频率（36.4%）显著高于T2DM不伴糖尿病视网膜病变组（38.8%; 20.9%. P<0.05）。由1704G/T和G82S构建的单倍体型分析发现G-A单倍体型发生视网膜病变的危险显著增加[odds ratio（OR） for 2.120,95 %confidence interval（CI）:1.185-3.792]。多因素logistic回归分析发现82S等位基因变异和糖尿病病程是T2DM视网膜病变的独立危险因素（OR=2.964, 95%CI:1.013-5.46,P =0.029; OR=1.013, 95% CI:1.007-1.02, P <0.001）。【结论】在武汉汉族人群中,RAGE基因82S等位基因变异预示胰岛B细胞功能降低,视网膜病变的危险性增加;1704T等位基因变异则预示胰岛B细胞功能降低,但伴高血压比例降低;由1704G/T和G82S构建的单倍体型中,G-A单倍体型是发生糖尿病视网膜病变的基因标记。第二部分:人体白色脂肪组织TLR4表达与肥胖相关性研究【目的】最新研究显示脂肪组织在先天免疫反应中起着一定的作用。而且,肥胖者的白色脂肪组织（white adipose tissue, WAT）具有巨噬细胞浸润和脂肪细胞肥大的特征性变化。我们的研究目的是确定人类WAT中TLR4蛋白质表达,并阐明其与肥胖的代谢表型、炎症标志物及白色脂肪组织形态学的关系。【方法】成对摘取30位择期胆结石摘除术的男性患者[年龄,34-60岁;体重指数（body mass index, BMI）:23.8±3.5 kg/m2]的腹部网膜脂肪和皮下脂肪。按标本来源者的体重指数和空腹血糖将标本分为正常体重组、超重非糖尿病亚组和超重糖尿病亚组。Western blot测定WAT中TLR4的蛋白质表达。免疫组化CD68抗体染色显示活性巨噬细胞。免疫比浊法测定血清高敏C反应蛋白（high-sensitive C-reactive protein,hs-CRP）。显微镜定量分析巨噬细胞浸润程度和脂肪细胞大小。多元线性回归分析WAT中TLR4蛋白质表达水平与肥胖的表型、hs-CRP及WAT形态学关系。【结果】Western blot明确人类皮下和网膜WAT（omental WAT, oWAT）中有TLR4的蛋白质表达。同一个体皮下WAT（subcutaneous WAT, scWAT）中TLR4的蛋白质表达水平显著低于oWAT（0.20±0.03 VS 0.59±0.19, P<0.001）。超重非糖尿病亚组TLR4的蛋白质表达水平无论oWAT和scWAT均高于正常体重组和超重糖尿病亚组（P<0.01）。超重糖尿病亚组oWAT中TLR4的表达水平亦高于正常体重组（P <0.01）。oWAT中CD68+数是scWAT的4倍（24.4±3.2 VS 6.1±2.9,P <0.001）。超重非糖尿病亚组和超重糖尿病亚组oWAT和scWAT中CD68+数均高于正常体重组（P <0.01）,但超重的两亚组间无明显差异。超重非糖尿病亚组oWAT中平均脂肪细胞直径及横截面积显著大于正常体重组（69.2±19.37μm VS 44.2±10.4μm, P =0.003; 4014.1±2443.1μm2 VS 1613.4±755.6μm2, P =0.04）。多元线性回归分析提示: oWAT中蛋白质表达水平与oWAT中巨噬细胞浸润程度（b’=0.635, P<0.001）、BMI （b’=0.201, P=0.02）及hs-CRP（b’=0.211, P =0.044）成正相关。【结论】人类WAT中存在TLR4的表达,肥胖是影响WAT中TLR4表达的主要因素,WAT尤其是oWAT中TLR4与肥胖和糖尿病的慢性低度炎症过程相关,血糖升高使TLR4的炎症作用减弱。

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• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 武汉汉族人群TLR4、RAGE 基因多态性与糖尿病相关性研究
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分：人体白色脂肪组织TLR4 表达与肥胖相关性研究
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述 模式识别受体与2 型糖尿病
• 参考文献
• 附录 在读期间发表论文（第一、二作者）
• 致谢