CD69、CD25及HLA-DR在川崎病患者外周血T淋巴细胞中表达的研究

论文摘要

【背景和目的】 川崎病（Kawasaki disease,KD）又称皮肤粘膜淋巴结综合征（mucocutaneous lymphnode syndrome,MCLS）,是小儿时期的一种急性发热性血管炎,其临床特点为发热、皮疹、皮肤及粘膜损伤和淋巴结肿大。潜在的危险是冠状动脉病损致狭窄、栓塞,致死的主要原因是心肌梗死。由于川崎病发病人数的不断增加,并存在不可低估的心血管并发症,目前已取代了急性风湿热成为儿童后天性心脏病的最主要疾病之一。 尽管国内外已做了大量的研究,迄今其病因及发病机制仍未完全明确。近年来由于免疫学的快速发展,对本病的发病机制研究有了很大突破。研究表明,超抗原学说的提出,揭示了多年来许多学者应用血清学和先进的培养技术均不能从川崎病患者体内寻找出某种单一病原体这一奥秘。免疫功能失调在川崎病浙江大学硕士研究生毕业论文的发病中起着重要作用,川崎病具有大多数发热出疹性疾病所没有的免疫系统异常活化。T淋巴细胞在免疫调节中具有重要的作用,T细胞的行为主要包括活化、增殖、克隆扩增、分化、凋亡和免疫记忆。T淋巴细胞对抗原肤加MHC的应答称之为T细胞活化,是T淋巴细胞在免疫调节中的重要组成部分。T淋巴细胞活化是体内特异性免疫应答的重要环节,但急性期川崎病病人外周血T细胞是否活化存在两种互相矛盾的报道。 CD69、CD25及HLA一DR作为活化T细胞的标志,近年引起国内外学者的高度关注,目前临床研究中关于CD25及HLA一DR的报道较多,对CD69的研究较少。对急性期川崎病患者外周血CD3+T淋巴细胞CD69、CD25及HLA一DR的检测,国内外均未见报道。本研究采用单克隆抗体与流式细胞术结合的手段进行检测和分析,其优越性是能在单个细胞水平及亚群水平上反映应答强度,且可以同时对应答细胞做多参数检测。通过检测急性期川崎病患者外周血CD3+T淋巴细胞CD69、CD25及HLA一DR的表达水平,可以全面了解急性期KD患者外周血CD3‘T淋巴细胞的活化情况,对进一步阐明KD的发病机理、了解疾病发生发展过程及转归具有极为重要的意义,为进一步研究抗细胞因子药物、进行免疫学治疗提供理论依据。【材料与方孩】 1、病例与分组急性期川崎病组31人,男16例,女巧例;年龄4一60月,平均26.23士17.79月,确诊后给予大剂量丙种球蛋白及阿斯匹林治疗,丙种球蛋白剂量:19/kg/d,连续2天（起病9天内使用）。阿斯匹林剂量:30浙江大学硕士研究生毕业论文50mg/kg/d。正常对照组17人,均来自我院儿保门诊健康体检儿童,其中男9例,女8例;年龄384月,平均24.76士18.17月。上呼吸道感染组8人,均为同期住院病人,发热超过3天,外周血常规及CRP均正常者,男4例,女4例;年龄1234月,平均19.25士7.80月。川崎病自身对照组8人,男5例,女3例;年龄21一42月,平均29.63士6.80月。2、FCM测定流式细胞仪微量全血直接免疫荧光法测定64例儿童外周血CD3‘T淋巴细胞、CD3‘CD69‘、CD3‘CD25‘、CD3‘HLA一DR‘T淋巴细胞表达水平。取试管4个,每管分别加全血30协1,分别为阴性对照管（加入CD3单抗）、测试管（加入CD3、CD69单抗）、测试管2（加入CD3、CD25单抗）、测试管3（加入CD3、HLA一DR单抗）,单抗剂量各为5 pl;置入4℃冰箱孵育20分钟;每管加入溶血剂400 pl,溶血10分钟;加PBS溶液洗一遍,离心1000转/分钟,共10分钟;去除上清液;细胞沉淀加2%多聚甲醛300林1固定后待机检查。应用美国Beeton Diekinson公司流式细胞仪（FACSCalibur）检测10000个细胞,激发光源为FITC（530/30）nm,PE（585/42）nm,PerCp（650）nm,先筛选‘r淋巴细胞,再用CD3设门,同型鼠IgGI分别作CD69、CD25及HIJA一DR的阴性对照。用Cellquest软件分析数据。结果以阳性细胞百分率表示。3、统计学处理:应用SPSSn.O统计软件,组内行方差分析,组间行t检验,P<0 .05为有显著性差异。数据采用均值士标准差（又士s）表示。浙江大学硕士研究生毕业论文【祛果】、急性期川崎病患者与正常健康儿童外周血CD3‘T淋巴细胞、CD3‘CD69CD3‘CD25‘、CD3‘HLA一DR‘T淋巴细胞表达水平相比较,川崎病患者CD3‘T淋巴细胞明显降低,其阳性细胞百分率均值士标准差为（54.39士8.98）%,正常对照组为（64.97士6.96）%,有显著性差异（P（0.001）;CD3‘CD69‘、CD3‘CD25‘、CD3‘HLA一I）R‘f淋巴细胞阳性百分率分别为（1 1.15士12.57）%、（9.17士3.54）%、（8.29士4.98）%明显高于正常对照组（0.60士0.41）%、（3.90士1.76）%、（4.27士2.33）%,其中CD3‘CD69‘、CD3‘HLA一DR‘有显著差异（P（0.01）,CD3‘CD25‘有显著差异 （P<0.001）。2、急性期川崎病患者与上呼吸道感染儿童外周血CD3卜T淋巴细胞、CD3‘CD69‘、CD3‘CD25‘、CD3‘HLA一DRT淋巴细胞表达水平相比较,川崎病组CD3卜1’淋巴细胞阳性百分率均值士标准差为（54.39士8.98）%,低于上呼吸道感染组 （60.60士4.90）%,但无显著性差异（P）0.05）,而CD3‘CD69‘、CD3’CD25‘、CD3‘HLA一DR‘T淋巴细胞分别为（1 1 .15士12.57）%、（9.17士3.54）%、（8.29士4.98）%明显高于上呼吸道感染组（1.57士0.91）%、（1.94士2.27）%、（2.32士1.45）%,存在显著差异（P<0,05）。3、急性期川崎病患者应用丙种球蛋白前后外周血CD3‘T淋巴细胞

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、正文
• 1、前言
• 2、材料与方法
• 3、结果
• 4、讨论
• 5、结论
• 6、参考文献
• 7、名词解释
• 四、综述
• 五、发表论文
• 六、致谢