论文摘要
摘要目的:从广西尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种小分子多肽（K组分）,研究其对癌细胞株的诱导凋亡作用及其他抗肿瘤相关机制。方法:经Sephadex G-75凝胶过滤,超滤和DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析法从广西尖吻蝮蛇毒中分离纯化获得一种小分子多肽,采用SDS-PAGE鉴定纯度并测定分子量;采用MTT法和平板集落形成实验检测其对癌细胞株的生长抑制情况;应用H.E染色和透射电镜观察细胞形态学的改变,AO-EB双荧光染色和流式细胞术（FCM）检测调亡的发生;PI单染流式细胞术检测K组分对细胞周期的影响;通过细胞黏附实验检测对肿瘤细胞黏附能力的影响;观察K组分对人脐静脉血管内皮细胞株的生长抑制和黏附抑制作用,并建立鸡胚尿囊模型观察其抗血管生成的活性。结果:从广西尖吻蝮蛇毒中分离纯化出的具有抗肿瘤活性的小分子多肽,SDS-PAGE鉴定其为单一组分,分子量为7862D左右。该组分对肿瘤细胞增殖有不同程度的抑制,对人卵巢癌细胞株A2780作用12、24、48h的半数抑制浓度（IC50）分别为1.36μg/ml、0.814μg/ml、0.566μg/ml;对人胃癌细胞株SGC-7901作用12、24、48h的半数抑制浓度分别为8.38μg/ml、3.21μg/ml、1.38μg/ml。当剂量在0.2～1.2μg/ml时,对A2780的集落形成抑制率从24～87%,有明显的量-效关系。普通光学显微镜和透射电镜下观察到1.00μg/ml的药物作用24h后的A2780细胞呈典型的凋亡形态学特征:细胞变小,细胞质浓缩,染色质边集碎裂,胞浆内出现空泡,细胞膜完整等;AO-EB荧光双染色也发现0.8μg/ml的K组分处理48h后,有大量染色质浓染碎裂呈橙色荧光的凋亡细胞出现,FCM检测发现,处理组细胞的早期凋亡率均显著高于对照组,浓度为0.8μg/ml时,早期凋亡率达到高峰,在这之后,晚期凋亡和坏死细胞比例显著增加,早期凋亡细胞的存在不明显。K组分能将A2780的细胞周期阻滞在G2/M期;能够剂量依赖性地抑制细胞同纤维连接蛋白（FN）的黏附;K组分呈显著剂量依赖性抑制脐静脉内皮细胞株ECV304增殖（作用24h的IC50为2.82μg/ml）和黏附及抑制鸡胚尿囊膜血管生成。结论:成功从广西尖吻蝮蛇中分离纯化出一种小分子多肽,该组分有去整合素理化性质和生物学活性,且对肿瘤细胞有不同程度的抑制作用,其作用的机理可能是通过诱导细胞凋亡,抗细胞黏附和抗新生血管生成来实现的。
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