氟对成纤维细胞增殖活性及血管内皮生长因子表达的影响

论文摘要

氟化物诱导成纤维细胞（fibroblast,FB）成骨功能的异常发挥,可能在氟骨症骨周软组织钙化和骨化的发生机制中起重要作用。本研究将通过建立FB胶原凝胶系统（fibroblasts populated collagen lattice ,FPCL）,研究氟化物在更接近体内生存环境条件下对FB细胞增殖活性的影响。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在骨形成和骨代谢过程中发挥重要作用,本文探讨在二维和三维两种培养体系中,氟对FB和成骨细胞（osteoblast,OB）中VEGF从mRNA到蛋白表达的影响,为证实FB成骨表型表达及成骨功能发挥在氟骨症骨周化骨发生中的重要作用提供科学依据,也为其他类似疾病的骨周骨化发生机制研究提供重要线索。应用体外细胞培养的方法,以小鼠FB株（L929）和小鼠颅骨成骨样细胞为研究对象。采用MTT法检测三维培养条件下,染氟FB的增殖活力,应用RT-PCR、Elisa和免疫组化等方法检测VEGF mRNA和蛋白的表达。结果表明,氟作用24、48和72 h时间段,各组FB细胞增殖活力多高于未加氟组,虽未达统计学差异显著程度,但增强趋势明显;染氟可明显上调FB VEGF mRNA和蛋白的表达,并发现在三维培养条件下氟上调作用更为明显。同样实验条件下,小鼠颅骨成骨样细胞染氟后VEGF的表达水平呈现与FB一致的上升趋势。本文结果表明:1.与二维培养结果比较,氟对三维培养中FB的增殖活力亦存在刺激作用,但作用发生较慢,程度相对较弱,可能与氟化物不能直接接触细胞有关;2.氟对二维、三维培养中FB VEGF表达均有明显刺激作用,提示VEGF在氟化物刺激FB成骨功能方面具有重要作用;3.氟对三维培养中FB VEGF表达增强作用更明显,是否提示在更接近体内环境的条件下,氟对VEGF的刺激增强作用更强?还需要进一步研究;4. OB染氟后VEGF表达增强趋势与FB类似,提示FB在氟化物的作用下向OB方向的转化。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写词表
• 第一章 绪论
• 一、VEGF 的结构特点
• 二、VEGF 的产生调节及与各细胞因子间的相互作用
• 三、VEGF 的生物学活性
• 四、VEGF 在骨发育形成与代谢中的作用
• 五、VEGF 在骨损伤修复中的作用
• 第二章 材料和方法
• 一、主要试剂和仪器
• 二、体外细胞培养
• 三、MTT 法检测三维培养体系中细胞的增殖活力
• 四、IHC 法检测染氟FB 和OB VEGF 蛋白的表达
• 五、酶联免疫吸附（Elisa）法测定培养细胞上清液中VEGF 蛋白的表达
• 六、PT-PCR 法检测染氟OB 和FB 中VEGF mRNA 的表达
• 第三章 实验结果
• 一、MTT 法检测三维培养体系中FB 的细胞增殖活力
• 二、IHC检测染氟FB和OB 中VEGF蛋白的表达
• 三、Elisa法检测氟对FB和OB中VEGF蛋白表达的影响
• 四、RT-PCR 法检测染氟48h FB 和OB VEGF mRNA 的表达
• 第四章 讨论
• 一、氟对三维培养FB 细胞增殖活力的影响
• 二、氟对二维培养FB和OB中VEGF表达的影响
• 三、氟对三维培养FB 中VEGF 表达的影响
• 四、FB VEGF 表达增强在FB 成骨功能发挥方面的作用
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢