论文摘要
研究背景据世界卫生组织有关资料研究表明,在二十世纪八十年代中期,糖尿病患者总量在3000万人左右,至九十年代中期十年间,增长4倍,达到1.2亿人,预计到2005年全球糖尿病患者总量将再翻一番,达到2.4亿人,年平均增长率10%左右。我国糖尿病患病率近10年内增长很快,1980年患病率约为6.09‰,1993年患病率达2.5 %,较10年前增长4倍。死亡率已上升至继肿瘤、心血管疾病之后的第三位。糖尿病带来的健康和经济问题已成为困扰国民的难题。2型糖尿病的主要发病机制是胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗。胰岛素受体一直被作为研究胰岛素抵抗、2型糖尿病的主要候选基因,但胰岛素受体在胰岛素抵抗中所扮演的角色仍不清楚。胰岛素受体编码基因突变可直接导致胰岛素效应的降低;胰岛素受体基因及蛋白表达量下调或胰岛素受体降解增加可导致胰岛素分泌障碍。上世纪80年代证实胰岛β细胞上有胰岛素受体和四种胰岛素受体底物蛋白（insulin receptor substrates, IRS）-1, 2, 3, 4及其下游的转导蛋白表达,如PI3K,p70s6k等。胰岛β细胞中的胰岛素信号转导蛋白可以被葡萄糖或直接被胰岛素刺激所活化,提示胰岛β细胞也是胰岛素作用的靶细胞。因此有学者提出了“β细胞上胰岛素抵抗学说”。β细胞上胰岛素受体表达异常对葡萄糖刺激下的胰岛素的第一时相分泌产生影响的研究很少。故本研究采用RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术,使βTC-3细胞上胰岛素受体mRNA表达下调,观察其对葡萄糖刺激下胰岛素第一时相分泌量的影响,并分析其量效关系,为2型糖尿病的发病机制研究提供新的资料。目的建立小鼠胰岛β细胞瘤细胞βTC-3胰岛素受体下调模型,用含不同浓度葡萄糖的培养液孵育,检测0、3、5、10分钟时的胰岛素分泌量,探讨β细胞上胰岛素受体表达对第一时相胰岛素分泌的影响及其量效关系。方法化学合成胰岛素受体基因的4对特异siRNAs（实验组:siRNA-1组,siRNA-2组,siRNA-3组,siRNA-4组）和1对非特异siRNA（NC组）。通过阳离子脂质体将siRNAs分别转染βTC-3细胞,24 h后荧光显微镜下观察不同浓度siRNA转染细胞的效率;同时应用逆转录PCR检测胰岛素受体mRNA表达;放射免疫法测量细胞在高糖刺激下的胰岛素第一时相分泌量。结果①50、100、150、200 nmol/L siRNA转染βTC-3细胞24 h后,转染效率分别为（73.1±4.07）%、（92.9±3.35）%、（90.8±4.02）%、（93.9±2.81）%,故选择100 nmol/L浓度作为siRNA转染浓度。②转染100 nmol/L siRNAs 24 h后,与对照组相比siRNA-1、2、3、4组βTC-3细胞胰岛素受体mRNA表达分别下调了62%、78.8%、0%和7.4%。③葡萄糖刺激的胰岛素一相分泌在5分钟峰值时siRNA-1组较对照组下降约27.7%,siRNA-2组较对照组下降约28.6%,siRNA-3组较对照组下降约7.3%,siRNA-4组较对照组下降约0.8%。结论①在βTC-3细胞导入胰岛素受体特异的siRNA,可有效抑制胰岛素受体mRNA的表达;②在βTC-3细胞葡萄糖刺激的胰岛素一相分泌有赖于胰岛素受体的表达。
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相关论文文献
- [1].胰岛素对βTC-3细胞胰岛素受体表达的作用[J]. 现代生物医学进展 2011(01)
- [2].基于TC-3系统的三相异步电动机试验[J]. 大电机技术 2014(04)
- [3].吡格列酮对游离脂肪酸作用下βTC-3细胞GPR40表达的干预作用[J]. 福建医科大学学报 2009(05)